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目的:复发性流产病因复杂,临床发病率达5%,治疗面临很大挑战。本课题研究正常妊娠和不明原因复发性流产患者胎盘绒毛Peroxiredoxin(Prdx)2表达的情况,探索Prdx2的表达降低对滋养细胞增殖和凋亡的影响;研究Prdx2表达降低对增殖和凋亡相关信号分子的调控机制;研究Prdx2的上游转录因子及其调控机制。本课题有助于进一步揭示复发性流产的发病机制,为临床诊治提供新的思路和方法。方法:收集不明原因复发性流产病人的胎盘绒毛样本,同时以孕6—12周人工终止妊娠的绒毛样本作为正常对照,采用Western blot,定量PCR,免疫组化,免疫荧光的方法研究两组样本绒毛Prdx2表达的差异,采用免疫组化和TUNEL检测绒毛增殖相关分子Ki67,凋亡相关分子cleaved caspase-3和细胞凋亡引起的DNA片段降解量。培养HTR8/SVneo(HTR8)细胞系,利用小干扰RNA转染技术,采用DCFH-DA荧光探针和CCK-8,检测细胞Prdx2敲减表达对细胞氧化还原状态和增殖的影响,用CCK-8检测敲减表达后不同浓度抗氧化剂NAC的使用对细胞活性的影响;采用BrdU,Annexin-V/PI染色,检测Prdx2的敲减表达及NAC的使用对细胞的增殖和凋亡变化的影响;收集胎盘绒毛进行体外培养,敲减Prdx2的表达,利用荧光双染检测Ki67的表达变化。培养BeWo细胞系,转染小干扰RNA,使用FSK诱导细胞融合,采用细胞免疫荧光通过检测E-cadherin的分布分析细胞的融合情况;利用定量PCR检测融合相关分子Syncytin-2的表达。采用Western blot检测Prdx2的敲减对p53,磷酸化p53和p21的影响及抗氧化剂NAC和p38-MAPK及JNK通路抑制剂的使用对上述分子的影响。收集胎盘绒毛样本,采用免疫组化验证相关分子在胎盘组织的表达和变化。利用TRANSFAC预测c-Myc在Prdx2启动子序列的结合位点,采用ChIP验证该结合位点。培养HTR8细胞系,加入不同浓度c-Myc抑制剂10058-F4,采用Western blot,定量PCR检测Prdx2表达的变化;利用小干扰RNA转染技术和过表达质粒转染技术,分别敲减和过表达细胞c-Myc,采用Western blot,定量PCR检测Prdx2变化情况。收集胎盘绒毛样本,采用Western blot,定量PCR,免疫组化和免疫荧光的方法研究样本绒毛c-Myc表达的差异,并对临床标本Prdx2和c-Myc的mRNA表达做相关性分析。利用小干扰RNA转染技术敲减细胞c-Myc的表达,采用CCK-8,Annexin-V/PI染色,Western blot,检测c-Myc敲减表达对细胞的增殖和凋亡及对p53,磷酸化p53和p21表达的影响。结果:Prdx2在不明原因复发性流产病人的胎盘绒毛细胞滋养层表达降低。Prdx2的表达降低可抑制滋养细胞的增殖,促进凋亡,抑制合体细胞分化,增加细胞内活性氧的积累,导致细胞活性降低,p53磷酸化水平升高,p38-MAPK激活,p21表达增加。不明原因复发性流产病人的胎盘绒毛同样也验证发现了其增殖减弱,凋亡增加,磷酸化p53和p21升高。在Prdx2的启动子序列具有c-Myc的结合位点,ChIP显示c-Myc直接结合至该位点,抑制或过表达c-Myc可分别降低或增加Prdx2的表达。c-Myc在复发性流产病人胎盘绒毛细胞滋养层表达降低,c-Myc表达降低同样抑制滋养细胞增殖,促进其凋亡。结论:Prdx2在胎盘绒毛的表达降低与复发性流产的发生具有相关性,其表达受到c-Myc的转录调控,Prdx2的表达降低抑制了滋养细胞增殖,促进了凋亡,抑制分化,可能与早期妊娠失败的发生相关。