奥利亚罗非鱼DMO基因的克隆及其性别决定机制初探

• 作 者: 唐永凯
• 机 构: 南京农业大学
• 出 处: 南京农业大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 罗非鱼 RACE DMRT DMRT1 DMO

罗非鱼是原产于非洲的热带鱼类，现已成为世界性的主要养殖鱼类。在生产上，罗非鱼雄鱼比雌鱼生长快40-50％，因此提高罗非鱼雄性率具有重要实践意义。在各种罗非鱼杂交组合中，奥尼杂交鱼的雄性率最高(95％)，但根据染色体决定性别理论，其雄性率应为100％。由于鱼类的性别决定机制是多样的和易变的，较高等动物要复杂得多，因而只有通过分子生物学的研究从基因水平进行探讨，才能揭示罗非鱼的性别控制机理，为进一步提高罗非鱼雄性率奠定基础。 DMO(DM-domain gene in Ovary)基因是DMRT基因家族的一种。而DMRT基因是哺乳类，爬行类，鸟类，以及鱼类等动物上的性别相关基因。它含有果蝇里的doublesex基因和线虫里的mab-3基因共有的DM- domain(doublesex和mab-3基因编码的蛋白质结合的DNA基序)。在鱼类上，目前还未发现哺乳动物的SRY／Sry以及Sox基因，但DMRT基因却广泛存在。本研究拟对奥利亚罗非鱼的DMO基因与其它鱼类的DMRT基因进行比较，分析。为以后进一步研究罗非鱼性别分化相差基因打下基础。 本课题采用RT和RACE(rapid amplification of cDNA ends)法从奥利亚罗非鱼卵巢中分离和测定了DMO cDNA的全序列。3′RACE扩增得到1217bp的片段，5′RACE得到455bp的片段，将3′片段和5′片段拼接得到全长cDNA，共1571bp[不含poly(A)]，包括148bp非翻译区，1230bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的193bp3’非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码409氨基酸，与尼罗罗非鱼DMO进行比较，同源性为96.3％，说明DMO在同物种中间差别较小。而与尼罗罗非鱼，红鳍东方豚，虹鳟，青鲻，鼠，人等动物的DMRT1进行比较，同源性分别为：25.7％，25.8％，24.3％，29.7％，22.5％，22.0％，这么低的同源性说明DMO和DMRT1可能起源于不同的基因。根据奥利亚罗非鱼DMO基因合成的特异引物在雌鱼和雄鱼的DNA中扩增到相同的条带，这也说明了DMO和DMRT1可能是两个不同的基因。有关DMO基因的表达以及与DMRT1之间的关系等，还有待于进一步研究。