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目的:观察药根碱对豚鼠离体胃窦环形肌收缩性能的影响,并探讨其可能的作用机制。材料和方法:
取300-400g健康雄性豚鼠,击昏放血后取下全胃,置入充有混合气的Krebs液中。沿胃小弯剪开后剪下胃窦部,涤清胃内容物。将其平整地固定在硅胶板上,小心地除去粘膜,沿环行肌纤维方向切取2×8mm大小的肌条。将打好结的肌条一端固定在带有两片铂板的浴槽底部,一端固定在连接有张力换能器的挂钩上,使肌条垂直悬挂于两片铂板之间,铂板上连接有电子刺激器。浴槽中装有10ml持续充灌5％CO2+95％O2混合气的37℃、pH值为7.4的Krebs液。调节肌条的起始张力至0.5 g,实验前每15分钟换液1次,平衡70-90分钟。自发收缩时,用数据采集系统记录肌条收缩的张力,以1 μmol/L的Ach引起的张力变化作为标准,来评价其它处理因素引起的张力变化。
实验的第一部分,观察药根碱对胃窦环形肌自发收缩的影响。首先依浓度梯度进行1-1000 μmol/L药根碱影响胃窦环形肌自发收缩的实验。药根碱的作用以1 μmol/L的Ach的作用作为参照,用百分数来表示,其值=药根碱引起的张力变化值÷Ach引起的张力变化值×100。完成上述工作之后,每15分钟漂洗肌条一次,约60分钟后肌条恢复至基础状态,分别加入河豚毒素、阿托品、M1受体阻断剂pirenzepine、M2受体阻断剂AF-DX 116、M3受体阻断剂DAU 5886、M4受体阻断剂tropicamide、5-HT1A/1B受体阻断剂pindolol、5-HT2受体阻断剂cinanseron、5-HT3受体阻断剂tropisetron、5-HT4受体阻断剂GR113808孵育,10分钟后再次进行1-1000μmol/L药根碱影响胃窦环形肌自发收缩的实验。
实验的第二部分,观察药根碱对电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩的影响。用数据采集系统记录收缩波曲线下面积S。首先考察肌条对电场刺激的反应性,待连续二次电场刺激所诱发的收缩相当(S1=S2),接着加入药物孵育,10分钟后记录第三次电场刺激诱发的收缩(S3),药物对电场刺激诱发的肌条收缩的影响以S3/S2来表示。依浓度梯度进行1-1000 μmol/L药根碱影响电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩的实验。完成上述工作之后,每15分钟漂洗肌条一次,约60分钟后肌条恢复至基础状态,分别加入以上提及的各种阻断剂及100μmol/L的药根碱孵育,10分钟后,记录电场刺激诱发的收缩S3,进行各种阻断剂影响药根碱增强EFS诱发的胃窦环形肌收缩的实验。
所有实验数据以均数±标准误(X±S.E.M.)表示;以unpaired t-test或One-way ANOVA及Newman-Keuls法分析。P＜0.05,表示差异具有统计学意义。
结果：
1.药根碱对胃窦环形肌自发收缩的影响
豚鼠胃窦环形肌存在有规律的自发收缩活动。药根碱(1-1000μmol/L)浓度依赖性地增强胃窦环形肌自发收缩,EC50值为65.7μmol/L。1 μmol/L的阿托品、1 μmol/L的河豚毒素和100 μmol/L的六烃季胺抑制药根碱的作用,而100μmol/L的L-NNA和10μmol/L的吲哚美辛对其无影响。
10-7-10-5mol/L的M1受体阻断剂Pirenzepine、M3受体阻断剂DAU 5884、M4受体阻断剂Tropicamide均浓度依赖性的抑制药根碱增强胃窦环形肌自发收缩,而10-5 mol/L M2受体阻断剂AF-DX 116对其无影响。
10-7-10-5 mol/L的5-HT2受体阻断剂Cinanserin、5-HT3受体阻断剂Tropisetron及5-HT4受体阻断剂GR113808抑制药根碱增强胃窦环形肌自发收缩,而10-5mol/L 5-HT1受体阻断剂Pindolol对其无影响。
2.药根碱对电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩的影响
药根碱(1-1000 μmol/L)浓度依赖性地增强电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩,Echo值为14.1 μmol/L。然而1000 μmol/L药根碱却不能进一步增强电场刺激诱发的收缩。药根碱浓度为300 μmol/L时S3/S2值最大,为3.0±0.4。阿托品和河豚毒素几乎完全阻断药根碱增强电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩;而六烃季胺、L-NNA和吲哚美辛不能阻断其作用。
10-6 mol/L Pirenzepine、DAU 5884和Tropicamide部分阻断药根碱增强电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩,而10-6 mol/L AFDX 116不能阻断其作用。
10-5 mol/L Cinanserin部分阻断药根碱增强电场刺激诱发的胃窦环形肌收缩,而10-5 mol/l Pindolol、Tropisetron和GR113808不能阻断其作用。
结论：
胆碱能受体和5-HT受体影响药根碱增强豚鼠胃窦环形肌收缩。药根碱引起的胃窦环形肌收缩可能主要通过M受体的M1、M3、M4亚型介导;药根碱引起的胃窦环形肌收缩也通过5-HT受体的5-HT2、5-HT3、5-HT4亚型介导。