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蝴蝶兰产业具有广阔的发展前景。新品种选育是蝴蝶兰产业的基础和持续发展的动力,快速繁殖蝴蝶兰新品种对推动蝴蝶兰产业发展有重要意义。组织培养快速繁殖是蝴蝶兰种苗生产的主要方法,但蝴蝶兰快速繁殖受基因型影响很大,什么样的快速繁殖途径效果好结论也不一致。本研究以四个蝴蝶兰新品系为材料,对其丛生芽途径和类原球茎途径的快速繁殖技术进行了研究,并对华蝶2号(hd-2)和华蝶4号(hd-4)两种快繁途径的快繁效率和hd-4两种快繁途径的遗传稳定性进行了比较研究,旨在建立蝴蝶兰新品系的快速繁殖技术体系。主要研究结果如下:
1.营养芽诱导消毒时间对污染率、褐化死亡率和营养芽诱导率有明显影响。0.1%氯化汞消毒8min的营养芽诱导率比消毒10 min的诱导率高,褐化死亡率低,污染率高;不同品系的褐化死亡率和营养芽诱导率不同,hd-2的褐化死亡率最低,营养芽诱导率最高。激素配比对hd-2营养芽诱导没有显著影响。
2.丛生芽增殖和根分化6-BA浓度对丛生芽增殖有显著影响,当6-BA浓度为10 mg·L-1时,华蝶1号(hd-1)、hd-2和华蝶7号(hd-7)的增殖系数最高,分别为3.21、1.80和3.33,且丛生芽生长健壮,叶色翠绿。Hd-4在6-BA浓度为12 mg·L-1时芽增殖系数最高,为2.96。不同品系的增殖系数有明显差异,hd-2的芽增殖系数最低。添加有机附加物能显著提高各品系的增殖系数,其中添加80 g·L-1土豆汁的效果最好。以单芽接入的方式比双芽接入更有利于丛生芽增殖,每瓶接入6个单芽的增殖系数最高。在一个培养周期更换新的培养基,对hd-2和hd-7的增殖系数没有显著影响,但对hd-1和hd-4则有显著影响。将2.0 cm高的无根苗接入含6-BA0.1 mg·L-1和NAA0.5 mg·L-1的1/3改良MS培养基中,各品系的生根效果最好。
3.类原球茎诱导、增殖和分化激素配比对叶片类原球茎的诱导有显著的影响,当TDZ为3.0 mg·L-1,不加NAA时,各品系的诱导率最高。不同品系的诱导率有明显差异,hd-7最高,为63.33%。培养基中添加BA0.5 mg·L-1和NAA0.1 mg·L-1时,hd-2和hd-4类原球茎的绝对生长速度最高,分别为215.84%和222.30%。材料大小和切割方法对类原球茎的绝对生长速度、芽分化数有显著影响。将类原球茎掰成10块约0.5g接种时,其绝对生长速度显著低于纵切的,但芽分化数显著高于纵切的。类原球茎接种在1/3MS(微量、维生素和铁盐均减半)+BA0.1 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+土豆汁80 g·L-1+蔗糖15 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1培养基上培养60 d后,再转接到相同培养基上培养60 d即可获得完整植株。
4.不同快速繁殖途径的效率无论是丛生芽途径还是类原球茎途径,hd-4在各代的繁殖速度都比hd-2的高,hd-2和hd-4在300 d内通过类原球茎途径繁殖出来的植株数比通过丛生芽途径繁殖出来的多,其比值分别为33:1和11:1。
5.不同快速繁殖途径的遗传稳定性从100个RAPD引物中筛选出11个多态引物,对通过两种快繁途径生产的hd-4各150株植株进行分析,引物B11、B17、B18和D15均检测出变异样品,丛生芽途径和类原球茎途径的变异率分别为0.67%和2.00%。形态学观察结果表明,丛生芽途径和类原球茎途径的变异率分别为0.33%和2.00%。利用选出的11个引物对5株形态学上发生变异的植株进行分析发现,引物A19、C17和D15在其中4株中检测到分子水平上的变异。
通过以上研究,建立了蝴蝶兰新品系的丛生芽途径和类原球茎途径的快速繁殖技术体系,为进一步优化蝴蝶兰种苗的工厂化生产,提高生产效率和效益提供了依据。