论文部分内容阅读
目的：探讨h-MSCs在缺氧条件下对肺腺癌细胞株A549生长、凋亡及迁徙能力的影响及在该过程中Survivin及HIF-α基因的表达情况。 方法： （1）通过沃顿胶法从新生儿脐带中分离人脐带组织细胞，观察细胞生长状况及形态学特征；流式细胞术进行h-MSCs免疫表型鉴定。 （2）常氧和缺氧条件下，建立A549细胞和h-MSCs的非接触共培养模型。CC K-8实验检测两种条件下h-MSCs对 A-549细胞增殖能力影响。通过Transwell小室实验测定两种条件下h-MSCs对A-549细胞体外迁移能力影响，Annexin-V/PI双染流式细胞术检测A-549细胞和h-MSCs共培养后存活情况，实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(qRT-PCR)法检测各组A-549细胞中Survivin及HIF-α基因表达。 结果： （1）成功从新生儿脐带中分离hMSCs，体外可获得稳定扩增，CCK-8实验显示第3-5代hMSCs生长状态最好，分离出的细胞可均一地表达基质细胞相关的表面标记CD90、CD73、CD105。不表达造血干细胞的表面标记CD34、人类白细胞共同抗原CD45、单核细胞表面标记CD14以及MHC-II类分子HLA-DR,，淋巴细胞表面标记CD19。 （2）与常氧共培养相比，缺氧条件下hMSCs和A549细胞共培养， A549细胞的增殖能力随着培养时间的增长增殖能力逐渐增强（p<0.05），72h最强。常氧条件下， hMSCs和A549细胞共培养，A549细胞的增殖能力较A549细胞单独培养下降（p<0.05）。而在缺氧共培养时，A549细胞的增殖能力较其常氧单独培养时也有所增强（p<0.05）。而在缺氧共培养时，A549细胞的增殖能力较其缺氧单独培养时也有所增强（p<0.05）。 （3）在缺氧条件下hMSCs和A549细胞共培养，A549的凋亡率较常氧共培养及缺氧单独培养均降低（p均<0.05），在常氧条件下hMSCs和A549细胞共培养，A549的凋亡率较缺氧共培养及常氧单独培养均有所升高（p均<0.05）。 （4）在缺氧条件下hMSCs和A549细胞共培养，A549的的体外迁徙能力较常氧共培养组明显增加（p<0.05），在常氧条件下hMSCs和A549细胞共培养后A549的的体外迁徙能力较单独培养未见明显变化（p>0.05），同组不同培养时间比较未见明显差异（p>0.05）。 （5）在缺氧条件下，无论是共培养组还是单独培养组，A549细胞的Suvivin、H IF-1α均较常氧条件下显著增加（p均<0.05）；与单独培养相比，hMSCs和A549细胞共培养后Suvivin、HIF-1α的表达也明显增强（p<0.05）。在常氧条件下， A549细胞和hMSCs共培养后Suvivin、HIF-1α的表达量和单独培养比较无显著差异（p>0.05）。 结论：（1）在缺氧条件下，hMSCs可促进A549细胞的抗凋亡能力，增殖能力及体外迁徙能力；（2）在缺氧条件下hMSCs可能通过进一步上调A549细胞Suvi vin、HIF-1α的表达促进A549细胞的抗凋亡能力，促进其增殖。