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【目的】通过观察芩部丹中的主要提取物对巨噬细胞表面Toll样受体2、4及其相关信号转导蛋白MyD88表达的影响,探求芩部丹抗结核作用的可能机制,以期为临床预防和治疗结核病提供新的思路。
【方法】①选用芩部丹的主要提取物作用于PMA刺激后的U937细胞,通过RealtimePCR方法,检测细胞TLR2、TLR4和MyD88的mRNA表达。②结核分枝杆菌无毒株H37Ra与PMA刺激后的U937细胞共同培养后,用芩部丹主要提取物干预细胞,通过Realtime PCR方法,检测细胞TLR2、TLR4和MyD88的mRNA表达;用FCM方法检测细胞TLR2和TLR4蛋白水平的表达;用Western Blotting方法检测细胞MyD88蛋白水平的表达。
【结果】①U937细胞经过PMA刺激分化,选用黄芩苷、对叶百部碱和丹参多酚酸盐分别干预细胞,发现黄芩苷组具有上调TLR2mRNA表达水平的作用。对叶百部碱和丹参多酚酸盐的作用不明显;②细胞和结核杆菌共同培养后,TLR2的mRNA和蛋白表达水平均下降,TLR4的mRNA表达水平下降,蛋白表达水平无变化,MyD88的mRNA和蛋白表达水平均下降;③黄芩苷、对叶百部碱和丹参多酚酸盐作用后,感染结核杆菌的细胞表面TLR2的mRNA和蛋白表达水平均上升,其表达水平与未感染结核杆菌的细胞相当;④黄芩苷和对叶百部碱作用后,感染结核杆菌的细胞表面TLR4的mRNA表达水平均上升,蛋白水平未见明显变化。丹参多酚酸盐对TLR4的表达无明显影响:⑤黄芩苷、对叶百部碱和丹参多酚酸盐作用后,感染结核杆菌的细胞内MyD88的mRNA表达水平均上升。黄芩苷和对叶百部碱作用后,MyD88的蛋白表达水平上升,丹参多酚酸盐作用后蛋白水平变化不明显。
【结论】依现有研究结果,可推断“芩部丹”组成各药之主要提取物的临床抗结核疗效与其影响Toll样受体通路,并提高针对结核分枝杆菌之抗痨固有免疫作用有关。