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目的:羊毛固醇合成酶抑制剂（RO 48–8071,RO）处理皮肤角质形成细胞（KCs）,探讨RO对皮肤角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制,为阐明甲羟戊酸途径在皮肤生长发育及皮肤疾病中的作用奠定基础。方法:（1）取外科手术正常皮肤组织,培养人的原代皮肤角质形成细胞（KCs）;（2）以不同浓度的RO（0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0μM）处理KCs 72 h,筛选有效RO浓度。（3）RO调控KCs增殖分析:以有效浓度的RO（10.0μM）或联合下游产物胆固醇（CH,40μM）作用于KCs（24h,48h和72h）,MTS法分析上述处理对细胞增殖的影响,流式细胞术分析其对KCs细胞周期的影响;提取细胞总蛋白,Western Blot法分析细胞周期相关蛋白CyclinB1及CyclinE表达变化。（4）RO对Ca2+诱导的KCs分化标志蛋白表达的影响:RO（10.0μM）单独或联合CH（40μM）作用于KCs 24h,48h和72h后,加入Ca2+（1.8mM）处理24 h,Western Blot方法分析KCs的分化标志蛋白Involucrin及Loricrin的表达情况。（5）流式细胞术分析RO对KCs的凋亡诱导作用:RO（10.0μM）单独或联合CH（40μM）处理KCs不同时间（24h,48h和72h）后,消化并收集细胞,流式细胞技术分析KCs细胞凋亡情况;上述方法处理细胞后,提取总蛋白,Western Blot法分析RO或联合CH处理对KCs细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2水平的影响。结果:（1）用不同剂量的RO作用KCs细胞,分析细胞增殖抑制情况,筛选出RO有效剂量为10μM;（2）MTS实验结果表明:RO（10.0μM）处理KCs 24h、48h、72h后,皮肤角质形成细胞增殖抑制率分别为10%、40%、65%,RO显著抑制KCs的增殖（p<0.05）;而补充CH（40μM）后三个时间点的增殖抑制率分别11%、32%、30%。处理48h及72h,胆固醇显著降低RO对KCs的增殖抑制作用（p<0.05）。（3）细胞周期分析结果显示,RO处理KCs 24h、48h、72h后,G1期的KCs细胞比例分别为63.19%、71.54%、83.16%,与对照组（54.89%）相比三个时间点均有显著性差异（p<0.05）,而S期细胞比例均显著下降;补充CH（40μM）后,G1期的KCs细胞比例分别是64.04%、69.17%、72.43%,与RO单独处理组相比,处理72h的G1期细胞比例显著下降（p<0.05）,而S期细胞比例显著上升。（4）RO诱导KCs细胞凋亡分析发现:RO（10.0μM）处理KCs后,在3个时间点（24h、48h、72h）均能够诱导凋亡,与对照组相比p<0.05;而CH（40μM）处理48及72h能够拮抗RO对KCs的诱导凋亡作用,且随着抑制剂RO作用的时间延长,KCs细胞的凋亡率越高;而在补充CH后,减弱了抑制剂RO对KCs的凋亡诱导作用。（5）Western Blot结果表明RO下调细胞周期相关蛋白CyclinB1、CyclinE的表达,具有时间依赖效应;CH能拮抗RO下调CyclinE的作用,对CyclinB1的表达没有明显影响。（6）RO处理KCs 48及72h后,显著下调Ca2+诱导的分化标志蛋白Involucrin及Loricrin的表达;而CH没有表现出对RO的拮抗效应。（7）RO单独处理KCs能够显著下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,作用时间越长,蛋白表达量越低,而对促凋亡蛋白Bax的表达无显著影响;CH处理72h时,能减弱RO对Bcl-2的抑制作用;Bcl-2/Bax的比值分析发现RO处理的KCs中,Bcl-2/Bax比例降低,且随着作用时间延长,Bcl-2/Bax的比值越来越低,而CH部分降低RO对Bcl-2/Bax比值的影响。结论羊毛固醇合成酶抑制剂RO能够抑制KCs的增殖、分化,诱导KCs细胞凋亡;其抑制KCs增殖的作用可能与RO抑制细胞周期相关蛋白表达进而诱导G1阻滞有关;RO抑制Bcl-2表达是其诱导KCs细胞凋亡的原因之一;CH部分拮抗RO对KCs的增殖抑制及诱导凋亡效应。这一初步的研究结果为解释甲羟戊酸代谢途径紊乱所致皮肤相关性疾病的发病机制奠定基础。