缝隙连接蛋白Cx43和Cx26在大鼠上皮细胞和成纤维细胞中表达的实验研究及磷酸化改变后的影响

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本文分为两个部分进行探讨:  第一部分 缝隙连接蛋白connexin43(Cx43)和connexin26(Cx26)在大鼠上皮细胞和成纤维细胞中表达的实验研究  目的:研究大鼠上皮细胞和成纤维细胞中缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)和缝隙连接蛋白26(connexin26,Cx26)的表达情况,以深入探索Cx43和Cx26在细胞缝隙连接通讯(GJIC)及经络循经感传中的作用。  方法:先将大鼠上皮细胞和成纤维细胞分开培养,然后再将这两种细胞联合培养,运用免疫组织化学法、间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦扫描显微镜(LCSM,LeicaTCS SP1)进行Cx43和Cx26蛋白的定位测定,采用流式细胞仪检测细胞膜上Cx43和Cx26蛋白的表达量。  结果:免疫组织化学法和间接免疫荧光细胞化学法显示Cx43和Cx26蛋白在上皮细胞和成纤维细胞及共培养细胞的细胞膜上和胞浆中表达;流式细胞仪检测结果显示在上皮细胞和成纤维细胞膜上Cx43蛋白的表达量分别为13.91%和29.53%,Cx26蛋白的表达量分别为13.88%和29.62%。  结论:Cx43和Cx26可能是大鼠上皮细胞和成纤维细胞中维持细胞缝隙连接通讯功能和经络循经感传特异表达的连接蛋白。  第二部分 缝隙连接蛋白Connexin43(Cx43)和Connexin26(Cx26)磷酸化改变后在大鼠上皮细胞和成纤维细胞中表达的实验研究  目的:研究佛波酯(TPA)和佛波酯(TPA)诱导分化的THP-1(TPA-primed THP-1,pTHP-1)细胞(人血单核细胞株)的培养上清液对培养的大鼠上皮细胞和成纤维细胞及共培养细胞中缝隙连接蛋白Connexin43(Cx43)和缝隙连接蛋白Connexin26(Cx26)表达的影响与Cx43和Cx26磷酸化状态的关系。  方法:TPA和TPA诱导分化的THP-1(TPA-primed THP-1, pTHP-1)细胞(人血单核细胞株)的培养上清液,先分别作用于大鼠上皮细胞和成纤维细胞,然后再作用于共培养的大鼠上皮细胞和成纤维细胞,采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦扫描显微镜(LCSM,Leica TCS SP1)进行Cx43和Cx26的定位测定。  结果:在大鼠上皮细胞和成纤维细胞以及共培养细胞中,均可见缝隙连接蛋白Cx43和Cx26的表达被明显阻断;上皮细胞与上皮细胞之间出现了明显的裂缝;成纤维细胞与成纤维细胞之间互相接触的细长尖角变短甚至消失,细胞与细胞之间较松软的絮状物消失。  结论:TPA和TPA诱导分化的THP-1(pTHP-1)细胞(人血单核细胞株)的培养上清液对培养的大鼠上皮细胞和成纤维细胞及共培养细胞中GJIC功能的调节机制可能发生在缝隙连接蛋白Cx43和缝隙连接蛋白Cx26的翻译后水平。
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