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蜡样芽孢杆菌B-02(Bacillus cereus B-02)分离自淄博市郊区感染灰霉病的大棚蔬菜土壤，是一株具有很强的抗番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)活性的拮抗细菌。为探讨该菌株对Botrytis cinerea的防病机理，本研究根据从Bacillus cereus B-02突变体基因组DNA扩增到的DJ-TO2基因片段(573 bp)，设计3条嵌套的特异性引物，与5条短的随机简并引物组成的引物库，分别用热不对称交错PCR法从Bacillus cereusB-02基因组DNA扩增该片段的5’和3’旁侧序列，经产物回收、测序、剪切拼接后，得到一段长2344 bp的MZ-BcP序列。
结合生物信息学及相关分析软件，对MZ-BcP序列进行分析，将该序列在Genebank中进行blastn同源性比对，发现该序列与芽孢杆菌(如Bacillus thuringiensis，Bacillus cereus)质粒的部分序列同源性较高，同源区序列编码蛋白为假定蛋白，具体功能目前尚未有研究。为了进一步研究位于Tn917插入位点处的基因与Bacilluscereus B-02具有强拮抗性之间的分子调控机制，本研究通过DNAStar等生物信息学软件对MZ-BcP序列进行开放阅读框(ORF)的查找，得到5个均包括Tn917插入位点的ORFs，分别为585 bp、498 bp、453 bp、321 bp、99 bp。根据功能ORFs注释原则：对于有重叠的ORF，选取与已知基因或蛋白质motif/domain有相似性的或选取较长的ORF，短于150 bp的ORFs，若没有与已知的蛋白motif/domain具有相似性，则被除去。本研究选用较大的ORF(585 bp)进行实验验证，并经DNAStar翻译后在NCBI中进行blastp比对，得知该翻译片段与Bacillus thuringiensis质粒上的一段复制蛋白同源性最高，分子量为22.3 kD，推测其可能为与抑菌活性相关的新基因或调控因子。
为了进一步验证该片段与Bacillus cereus B-02拮抗性的关系，即该ORF能否成功表达，用585 bp ORF作为目标基因片段进行克隆扩增，构建原核重组表达载体pET-32a(+)-MZF585并转化E.coli BL21(DE3)感受态菌株进行诱导表达，得到相对分子量约为42.3 kD的融合表达蛋白，理论推测值与实际表达值相符合。