【摘 要】
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目的:长QT综合征(Long QT Syndrom,LQTS)是由于编码心脏离子通道的基因突变导致相应离子通道功能异常而引起的以QT间期延长,突发晕厥、惊厥甚至猝死为特征的心脏病.目前已证
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目的:长QT综合征(Long QT Syndrom,LQTS)是由于编码心脏离子通道的基因突变导致相应离子通道功能异常而引起的以QT间期延长,突发晕厥、惊厥甚至猝死为特征的心脏病.目前已证实6种遗传学异常与常染色体显性遗传的LQTS有关(LQT1-6).其中LQT2的致病基因定位于第7号染色体(7q35-36)的HERG基因(ether-a-go-go-related gene),调控延迟整流钾电流中的快速型(I<,kr>).该文将以HERG基因为例,将电生理和分子生物学技术结合起来,从基因的角度研究离子通道的结构功能.方法:在体外将离子通道HERG基因的质粒cDNA转化到大肠杆菌DH5 α中扩增、提取、纯化,限制性内切酶EcoR Ⅰ酶切成线性化模板并转录成cRNA,微注射到蛙卵细胞中进行内源性表达,记录电生理电流.再将HERG基因转染至体外培养的人胚胎肾HEK-293细胞中进行外源基因表达.结果:扩增后质粒提取物在1﹪琼脂糖凝胶中电泳,可得到与原质粒清晰一致的条带,且转化效率较高.酶切后的产物呈单一条带,证实酶切完全.将表达有HERG基因的卵母细胞保持电位-80mV,跃阶电压10mV,指令电位的步阶范围由-100mV至+50mV,可获得正常HERG基因的离子通道电流.HERG离子通道的基因转染至HEK-293细胞获得单克隆细胞株.结论:cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞能确切进行表达,生成有活性的蛋白质.应用非洲爪蟾卵母细胞对外源离子通道基因进行表达,在国外已经被普遍采用,并且广泛应用于心血管学、药理学及神经生物学等领域,是目前离子通道结构和功能研究中的一种重要方法.
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