卫矛总黄酮纯化工艺及其指纹图谱的研究

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目的:确立大孔树脂纯化卫矛总黄酮的最佳工艺。建立不同产地及不同部位卫矛的指纹图谱,并鉴定其共有峰。测定不同产地及不同部位卫矛中有效成分(总黄酮、芦丁和槲皮素)的含量。 方法:采用正交试验考察树脂种类、洗脱液pH值等因素对纯化卫矛总黄酮的影响。用紫外—可见分光光度法测定总黄酮含量,将所得结果进行方差分析,进而确定大孔树脂纯化卫矛总黄酮的最佳工艺。利用高效液相色谱,采用梯度洗脱的方法,建立卫矛各样品的指纹图谱,并对所得结果进行相似度和系统聚类分析。然后,利用二极管阵列检测器及质谱检测器,获得共有峰的紫外及质谱图,对色谱峰进行鉴定。最后,采用紫外—可见分光光度法和高效液相色谱法测定卫矛有效成分的含量。 结果:大孔树脂纯化卫矛总黄酮的工艺研究结果表明:最佳大孔树脂为AB.8树脂,其吸附量和解吸率分别是7.32 mg/g和90.98%。优化后的工艺可使提取物中总黄酮的含量由7.64%提高到52.12%。所建立的色谱—质谱条件经方法学考察,结果符合要求,并得到了理想的指纹图谱,确定了十二个色谱峰为共有峰。相似度分析结果表明:不同产地样品的共有峰相对保留时间的相似度较高,而相对保留峰面积的相似度较低,这说明各样品所含化合物种类基本相同,而含量差异却比较大。系统聚类分析结果表明:十产地样品可分为三大类,为确定该药材的采集产地提供了参考依据。根据色谱峰的紫外及质谱图,鉴定了其中的五种化合物(对羟基苯甲酸、金丝桃苷、芦丁、槲皮素和丁香酚苷)。最后,测定了各产地及黑龙江产卫矛各部位中有效成分的含量。 结论:本研究所建立的大孔树脂纯化方法能明显提高提取物中有效成分含量,为实际生产中利用大孔树脂纯化卫矛提供了参考数据。所建立的色谱—质谱条件为卫矛及其相关制品的鉴别、质量控制和有效成分的含量测定提供了科学、可靠的方法,为该药材的后续开发奠定了坚实的基础。
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