论文部分内容阅读
艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症（Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）感染人体淋巴细胞等所致。自1981年艾滋病首次在美国发现以来，全球大约已有2500万人死于艾滋病相关疾病，3340万人感染艾滋病病毒，其中包括1570万妇女及210万15岁以下儿童。理论上，病毒复制的每个步骤都可成为抗HIV药物的研究靶点，但实际上，目前抗HIV药物的研究重点仍然聚焦于逆转录酶、蛋白酶、整合酶及病毒吸附融合等几个靶点。自1987年第一个抗HIV药物核苷类逆转录酶抑制剂AZT上市以来，已有32种药物被FDA批准使用。目前常用于临床治疗AIDS的方法，高效抗逆转录病毒疗法-HAART（Highly Active AntiretroviralTherapy）也称为鸡尾酒疗法，此疗法虽能显著延长病人的寿命，但仍不能彻底清除病人体内的HIV，且毒副作用大、费用高，使病人承受着巨大的经济和生理负担。因此开发研究低毒、廉价、新型抗HIV药物非常必要。
中药历史悠久，资源丰富，具有多功能、多成分和结构多样的特点，而且有些传统中药经过临床试用，显示了一定的抗HIV疗效，为开发新药和寻找新的抗HIV有效成分提供了宝贵的线索。天南星（Araceae）《中国药典》描述其为辛温，有毒，归胃、肝经，有祛风痰，定惊搐，解毒散结止痛之功效。民间广泛用于治疗癌症，尤以生食治疗喉癌为多。天南星药理作用广泛，但对其抗HIV活性除本实验室外没有报道，因此研究其抗HIV活性意义重大。
本研究在体外药效学活性实验指导下，利用各种分离纯化手段，对天南星30％乙醇提取物进行分离，找出具有抗HIV活性的有效部位及有效化合物。前期实验结果显示，E2、E1-2和E1-2b都有很好的抑制HIV-1活性，在浓度为31.25、125、125μg/mL时病毒抑制率达到71.43％、78.57％和74.88％；本实验通过Biacore分子偶联技术进一步对有效部位抗HIV活性加以证实，更重要的是研究其作用靶点及作用成分。通过研究发现E1-2和E1-2b都与整合酶有较好的结合情况，其中E1-2在浓度为50、100、200、300μg/mL时，与IN的结合量为128.5、165.4、214.9、249.4RU，呈现剂量依赖性，E1-2b在浓度是200、300μg/mL时，结合量为151.0 RU和238.0 RU。进一步利用各种柱色谱、重结晶等手段，从E1-2b中分离到4个化合物，通过特征化学反应及光谱学方法，鉴定了其中2个化合物的结构，剩余2个化合物结构正在鉴定中。并且在E1-2甲醇溶解部分也分离到4个化合物，结构已经鉴定。
综上所述本文从30％乙醇有效部位得到8个单体化合物，其中6个结构已经鉴定为氨基酸多肽类、有机酸等，另外2个HPLC显示为单体，结构正在鉴定中。在已鉴定结构的这6个化合物中，其中有3个时首次在本植物中发现。对这8个化合物利用Biacore分子偶联技术检测其作用靶点，发现化合物1在测试溶液PBS中溶解度不好的情况下，当浓度为200、400μg/mL时，与IN的结合量为124.2、145.4 RU。化合物2在浓度200μg/mL时，结合量为95.7RU。Biacore的实验结果显示IN可能是E1-2、E1-2b以及化合物1的作用靶点，本文为天南星抗HIV进一步研究提供了理论和实验依据。