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目的: 1.从多层次、多角度探讨健脾益气中药治疗胃溃疡的可能机制。 2.通过对消炎痛再损伤的研究探讨健脾益气中药抗再损伤的可能机制。 方法: 实验一:健脾益气中药对乙酸致胃溃疡大鼠溃疡指数和表皮生长因子及其受体的影响 1.模型复制、分组及喂药 32只wistar大鼠，雄性，体重180～250克。实验性乙酸致大鼠胃溃疡模型参照张氏的方法并加以改进。 术前禁食24小时，自由饮水，乙醚麻醉后，固定于手术台上，腹部剃毛，常规消毒。于剑突下腹中线打开腹腔（手术切口约2cm左右），暴露出胃。在胃前壁近幽门处（避开血管），用微量注射器将100％的冰醋酸0.01ml，由浆膜面注入胃的粘膜下层处，注射后，胃壁表面立即形成一个圆形或椭圆形的隆起，然后隆起变平出现一个圆形或椭圆形的乳白色不透明区。直径为5mm。用缝线将大网膜固定于注射区，以防穿孔。逐层缝合切口，手术过程按无菌操作。 大鼠随机均分为4组，分别为空白组、模型组、健脾益气组、雷尼替丁组。用药剂量换算按体重计算dB=dA×KB/KA。各组大鼠均在造模3天后灌胃，其中空白组、模型组给予生理盐水，健脾益气组给予健脾益气中药煎剂，雷尼替丁组给予生理盐水溶解的雷尼替丁，每天1次，0.5ml/100g，连续灌胃14天。 2.标本收集及确定溃疡指数 将大鼠的胃沿大弯剪开，在生理盐水中冲洗干净，将胃自然展开，滤纸汲干，用游标卡尺测量溃疡的长度和宽度，溃疡长度指溃疡的最大直径，宽度为与直径垂直的最宽距离，溃疡指数用溃疡的长×宽表示。剪取含溃疡边缘约3mm组织在内的溃疡组织块，迅速置于10％福尔马林溶液中固定24小时以上。 3.组织病理学检测 HE常规染色，光镜下进行观察。 4.表皮生长因子(EGF)的含量测定 严格按照说明书进行。 5.表皮生长因子受体(EGFR)的检测 采用免疫组织化学SABC法染色，光镜观察EGFR表达。经高清晰度病理图文分析系统处理，记录积分光密度值及阳性细胞占总面积的百分比。 实验二:健脾益气中药对乙酸致胃溃疡大鼠氨基己糖及前列腺素E2的影响 1.模型复制、分组及喂药 同第一部分。 2.氨基己糖含量测定 采用生化的方法进行测定。 3.组织中前列腺素E2(PGE2)的含量测定 严格按照说明书进行。 实验三:健脾益气中药对乙酸致胃溃疡大鼠氧自由基及胃粘膜超微结构的影响 1.模型复制、分组及喂药 同第一部分。 2.标本的收集和处理 最后一次灌胃后，所有大鼠禁食24小时，然后将大鼠断头处死，每只取血4ml。剖腹取胃，沿胃大弯剪开，用生理盐水冲洗胃内残留物，汲干后展平，在溃疡周围剪取100mg左右的胃组织，制为10％生理盐水匀浆液，4300rpm，4℃离心15min，取上清液待测。 3.超氧化物歧化酶(SOD)含量的测定和丙二醛(MDA)含量的测定严格按照说明书进行。 4.电镜检测 将大鼠处死，按电镜要求取材，经脱水、浸透、包埋、切片、染色，最后在透射电镜下观察。 结果: 1.大鼠胃粘膜光镜下病理形态变化及计算溃疡指数 空白组:壁细胞排列整齐，呈串珠状，粘膜肌层完整。模型组:腺体排列紊乱，腺腔扩大，腺腔内可见炎细胞浸润，粘膜肌层断裂，瘢痕与肉芽组织中血管数量少，管腔中红细胞少。雷尼替丁组:腺体排列较紊乱，腺体倾斜，仍可见扩张较大的腺腔，粘膜肌层仍有断裂，瘢痕与肉芽组织血管数量较多，管腔中红细胞较少。健脾益气组:腺体排列较规整，腺体囊性扩张较小，腺体稍倾斜，腺体分化好，接近正常，粘膜肌层较完整，瘢痕与肉芽组织中血管数量丰富。 溃疡指数:与模型组(4.39±3.51)相比，雷尼替丁组(1.88±1.80)、健脾益气组(2.21±1.20)大鼠溃疡指数均明显降低(P＜0.05);雷尼替丁组与健脾益气组大鼠溃疡指数没有明显差异(P＞0.05)。 2.组织EGF含量的变化 与空白组(22.99±4.67)相比，模型组(33.34±8.47)、雷尼替丁组(49.27±9.29)、健脾益气组(57.78±7.70)EGF含量均明显增高(P＜0.05，P＜0.01);与模型组相比，雷尼替丁组、健脾益气组EGF含量均明显增高(P＜0.01);雷尼替丁组与健脾益气组EGF含量没有明显差异(P＞0.05)。 3.血清EGF含量的变化 与空白组(0.55±0.082)相比，模型组(0.68±0.1572)、雷尼替丁组(0.71±0.2046)、健脾益气组(0.83±0.068)EGF含量均明显增高(P＜0.05，P＜0.01);与模型组相比，健脾益气组EGF含量明显增高(P＜0.05)，雷尼替丁组EGF含量增高没有显著性(P＞0.05);雷尼替丁组与健脾益气组EGF含量没有明显差异(P＞0.05)。 4.组织EGFR的表达 经高清晰度病理图文分析系统测定EGFR阳性细胞的平均面积百分比和积分光密度:与空白组(10.43±3.84)相比，模型组(19.83±5.76)、雷尼替丁组(26.61±6.23)、健脾益气组(27.14±7.03)EGFR的面积百分比明显增高(P＜0.01);与模型组相比，雷尼替丁组、健脾益气组EGFR的面积百分比明显增高(P＜0.05);雷尼替丁组与健脾益气组EGFR的面积百分比没有明显差异(P＞0.05)。与空白组(0.72±0.22)相比，模型组(1.48±0.72)、雷尼替丁组(2.13±0.90)、健脾益气组(2.31±0.64)EGFR的积分光密度明显增高(P＜0.05，P＜0.01);与模型组相比，健脾益气组EGFR的积分光密度明显增高(P＜0.05);雷尼替丁组与健脾益气组EGFR的积分光密度没有明显差异(P＞0.05)。 5.胃组织中前列腺素E2(PGE2)含量的变化 与空白组(864.21±132.14)相比，模型组PGE2含量(606.66±39.67)明显降低(P＜0.01)，雷尼替丁组PGE2含量(795.16±116.21)没有明显变化(P＞0.05)，健脾益气组PGE2含量(986.92±134.52)明显升高(P＜0.05);雷尼替丁组和健脾益气组比模型组均明显升高(P＜0.01);健脾益气组明显高于雷尼替丁组(P＜0.05)。 6.氨基己糖含量的变化 与空白组(4.29±0.70)相比，模型组(2.49±0.31)和雷尼替丁组(2.46±0.63)氨基己糖含量明显降低(P＜0.01)，健脾益气组(4.10±1.43)没有明显变化(P＞0.05);雷尼替丁组与模型组的差异没有显著性(P＞0.05)，健脾益气组比模型组均明显升高(P＜0.05);健脾益气组比雷尼替丁组也明显升高(P＜0.05)。 7.胃组织中超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化 与空白组(15.50±2.95)相比，模型组(14.39±2.11)和雷尼替丁组(15.12±2.83)SOD含量没有明显变化(P＞0.05)，健脾益气组(20.08±3.69)SOD明显升高(P＜0.01);雷尼替丁组与模型组没有明显差异(P＞0.05);健脾益气组比模型组明显升高(P＜0.01);健脾益气组明显高于雷尼替丁组(P＜0.01)。 结论: 本论文研究显示: 1.健脾益气中药可促进溃疡的愈合，它可通过增加组织中及血液中的EGF含量来发挥共抗溃疡作用。而且免疫组织化学提示，EGF可能是通过与EGFR结合后才具有进而促进溃疡愈合。研究结果显示健脾益气中药发挥作用的途径比较广泛，即组织和血清中的EGF都可能通过与其受体EGFR结合而起到促进溃疡愈合的作用，这一作用可能是通过介导减少胃酸分泌及增加粘液分泌实现的，所以它即可以减少攻击因子对胃粘膜破坏作用又可以增加胃粘膜防御作用。 2.健脾益气中药可以促进胃粘膜屏障的修复，使其防御功能接近正常水平，其机理可能是通过增加PGE2含量来完成的。健脾益气组氨基己糖含量明显高于雷尼替丁组，表明健脾益气中药在促进胃粘膜屏障恢复方面优于雷尼替丁。总之，应用健脾益气中药，调理脾胃，提高机体抵抗能力，增强了胃粘膜的防御功能，降低了攻击因子对胃粘膜的侵袭，故收到较好治疗实验性溃疡的作用。 3.健脾益气中药能起到加速溃疡愈合的作用，它可能通过增加组织及血清中SOD的活性，并减少其MDA的生成，既增加了保护因素又减少了损害因素，从而起到了加速溃疡愈合的作用。同时表明健脾益气中药在促进溃疡愈合的过程中发挥作用的途径比雷尼替丁广泛。电镜结果也发现雷尼替丁和健脾益气中药在溃疡愈合过程中对受损的细胞超微结构有明显的改善作用，其中健脾益气中药作用更好。 4.健脾益气中药不但可促进乙酸溃疡的愈合，还可增强大鼠抗消炎痛再损伤的能力，但健脾益气中药抗再损伤的能力优于雷尼替丁。PGE2增加可能是健脾益气中药增强胃粘膜抗消炎痛再损伤能力的机理之一。健脾益气中药还可能通过增加SOD的含量而增加了氧自由基的清除，从而减弱了消炎痛参与的氧化作用对胃粘膜的损害。这可能是健脾益气中药抗消炎痛再损伤能力增强的另一个机理。