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目的1.前期实验研究发现,micro RNA-223-3p(mir-223-3p)影响RPS6KB1/HIF-1α信号通路抑制大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMECs)血管生成。本研究以此为基础,进一步探讨益气活血中药干预大鼠缺血CMECs血管生成的micro RNA作用机制。2.观察益气活血中药对急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)合并心衰(Heart Failure,HF)患者血浆mir-223-3p的影响。方法1.实验研究(1)在前期实验研究基础上,依据益气活血中药(芪参益气滴丸)不同浓度培养缺血CMECs的生物学特征,设定最佳剂量、最佳“窗口”期缺血CMECs为干预组,Trizol分别提取干预组、缺血模型组(MX)和正常对照组(ZC)总RNA。基因芯片检测各组micro RNA(mi RNA)的动态表达变化,筛选差异表达显著的mi RNA,real-time PCR验证,拟定芪参益气滴丸干预缺血CMECs血管生成的核心mi RNA。(2)real-time PCR检测核心mi RNA靶基因及信号通路基因HIF-1α、VEGF、MAPK、PI3K、AKT的m RNA表达。(3)Western-blot检测靶基因及HIF-1α、VEGF、MAPK、PI3K、AKT的蛋白表达。2.临床研究选取AMI患者35例,其中合并HF患者23例。将AMI合并HF患者随机分为治疗组12例和对照组11例。对照组予常规西药治疗,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗。分别于治疗前和治疗后7天、14天检测各组血浆mir-223-3p、BNP的表达变化。结果1.实验研究(1)与ZC组比较,mi RNAs在MX组有8个上调、15个下调,干预组有16个上调、18个下调;与MX组比较,干预组mi RNAs有26个上调、21个下调;mir-223-3p在干预组较MX组表达下调0.117倍,具有显著统计学差异,确定mir-223-3p是芪参益气滴丸干预缺血CMECs血管生成的核心mi RNA。real-time PCR验证结果与基因芯片结果一致。(2)与ZC组比较,靶基因RPS6KB1 m RNA表达在MX组和干预组均上调(P=0.000,P=0.051);与MX组比较,干预组表达显著下调(P=0.000)。与ZC组比较,RPS6KB1蛋白表达在MX组下调(P=0.001),干预组上调(P=0.491);与MX组比较,干预组表达显著上调(P=0.001)。(3)RPS6KB1/HIF-1α信号通路相关分子HIF-1α、VEGF、MAPK、PI3K、AKT的m RNA和蛋白表达在干预组较MX组明显上调。2.临床研究(1)AMI合并HF患者治疗前和治疗后(7天、14天)血浆mir-223-3p比较治疗前,mir-223-3p表达为对照组1.022±0.218、治疗组1.012±0.154,两组比较无差异(P>0.05);治疗后7天,mir-223-3p表达为对照组0.507±0.095、治疗组0.390±0.058,两组比较有显著差异(P<0.01);治疗后14天,mir-223-3p表达为对照组0.296±0.046、治疗组0.197±0.040,两组比较有显著差异(P<0.01);与治疗前比较,均有显著差异(P<0.01)。(2)mir-223-3p、BNP相关性分析mir-223-3p表达与BNP表达均呈正相关,相关系数为对照组r=0.941(P<0.01),治疗组r=0.964(P<0.01)。(3)AMI患者与AMI合并HF患者治疗前、治疗后14天血浆mir-223-3p比较治疗前,mir-223-3p表达为AMI组1.011±0.148、AMI合并HF组1.012±0.154,两组比较无差异(P>0.05);治疗后14天,mir-223-3p表达为AMI组0.137±0.025、AMI合并HF组0.197±0.040,两组比较有显著差异(P<0.05),与治疗前比较mir-223-3p表达均显著降低(P<0.01)。结论1.确定mir-223-3p是芪参益气滴丸干预缺血CMECs血管生成的核心mi RNA。2.靶基因RPS6KB1基因和蛋白表达的分离现象符合mi RNA负性调控机制,应用益气活血中药干预后,明显改善了这种分离现象。3.芪参益气滴丸通过下调mir-223-3p的表达,激活RPS6KB1/HIF-1α信号通路,使血管生成关键分子VEGF、p38 MAPK、PI3K、AKT等表达水平升高,促进缺血心肌血管生成,为益气活血中药干预缺血心肌血管生成提供了理论依据。4.益气活血中药治疗AMI合并HF患者优于单纯西药治疗,可能与下调血浆mir-223-3p的表达有关。血浆mir-223-3p的表达与BNP水平呈显著正相关关系,表明mir-223-3p可能成为诊断心衰的新的血浆标志物。