介孔氧化硅纳米材料介导siRNA进行基因治疗的初步研究

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在众多的基因治疗载体研究中,介孔氧化硅纳米材料(MSNs)作为基因载体的研究越来越受到人们的广泛重视,近年来,已经成为了纳米材料研究中的前沿和热点之一。这主要是由于它自身具有的一系列如规则的形状和孔道结构、较高的比表面积、易制备、较大的孔积、孔径、在一定范围内易调控且容易靶向修饰等优势。本文首先介绍了扫描电镜和透射电镜下未经修饰(D-MSNs)、20%氨基化修饰(N-MSNs)、4%转铁蛋白靶向修饰(Tf-MSNs)的MSNs的形貌特征。接下来通过X-射线衍射、Zeta电位、傅里叶变换红外光谱来表征材料的成分、结构及重要的物化性能,并利用琼脂糖凝胶电泳与微量紫外分光光度计相结合的方式来研究材料对治疗基因的吸附、释放以及保护功能。最后利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪来检测材料携带功能化的siRNA进行Hela细胞的体外摄入效果以及对Survivin基因进行沉默致使Hela细胞凋亡的情况。结果表明MSNs为规则均一的球形粒子,粒径为(200±10)nm;具有一定的孔道结构且孔道六方有序;红外检测表明成功进行了氨基化修饰和转铁蛋白修饰。未经DNA吸附之前材料分散,吸附特定量DNA之后,N-MSNs有聚集的趋势,Tf-MSNs有少量的聚集现象发生。在2mg的MSNs体系中,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs对20bp的DNA片段(160μg/mL×100μL)的吸附率为12.1%、93.7%、90%;N-MSNs、Tf-MSNs的释放率为72.8%、60.5%;吸附DNA后,核酸酶处理与未处理的材料同时进行释放,释放率相差非常小。采用Hela细胞进行细胞摄入,D-MSNs、N-MSNs、Tf-MSNs的摄入效率分别为34.25%、95.86%、99.33%;细胞凋亡率检测为4.14%、8.45%、16.98%。此次研究,成功的对MSNs进行了针对于体外转染的氨基化修饰和针对于靶向转染的转铁蛋白修饰。细胞外研究修饰后的材料对治疗基因具有很好的吸附释放与保护效果。Hela细胞摄入效率非常高,并且Tf-MSNs的平均摄入量很大,且具有较好的细胞凋亡趋势。证明了转铁蛋白修饰后的MSNs靶向性能良好,具有成为理想的基因载体的潜能。
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