中国特有植物羊踯躅遗传多样性的ISSR分析

来源 :江西师范大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:jinshu
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从 5 个天然居群(金溪、庐山、井冈山、武宁和瑞昌)采集羊踯躅样品,用改良的2×CTAB法从样品叶片中提取基因组DNA,优化了PCR循环参数,建立了ISSR-PCR扩增的最佳反应体系,从167条随机引物中筛选出多态性好且清晰度高的引物,并用筛选出的引物对39个羊踯躅个体的基因组DNA进行扩增,对羊踯躅居群的遗传多样性和遗传结构进行了研究。 实验结果表明用丙酮对样品进行预处理可以提高产物的纯度。ISSR-PCR扩增条件经过优化后确定为在25μl 的 ISSR-PCR 反应体系中,各项因子最适条件为:模板 DNA30~45ng/25 μl,Mg<2+>2.0~2.5mmol/l,dNTPs0.1~0.15mmol/l,引物0.3~0.4 μmol/l,Taq 酶0.5~1.0U;10×PCR buffer 2.5μl,加ddH<,2>O至25μl。其热循环参数为:94℃预变性5min,之后进行30个循环(94℃1min,55℃30s,72℃2min),最后72℃延伸7min后在4℃终止反应。 本研究对167条ISSR引物进行了筛选,筛选出多态性好且清晰度高的13条引物用于5个居群39个样本的扩增。结果共检测到196个位点,其中190个为多态性位点,多态性位点百分率(PPB)为96.94%。 根据不同个体的扩增图谱构建了0、1矩阵输入计算机。数据处理结果如下:POPGENE 分析表明羊踯躅具有丰富的遗传多样性(H=0.3342,I=0.5007)。Nei’s遗传多样性和AMOVA分析表明,居群间存在有一定的遗传分化(Gst分别为0.5084和0.5320)。由UPGMA聚类分析可知金溪、庐山、井冈山和武宁四个居群聚为一支,瑞昌居群单独作为一支。由Mantel相关性检测可知,居群的遗传距离与地理距离有一定的相关性,但并不显著。 通过对羊踯躅遗传多样性和遗传结构的研究,提出了保护羊踯躅遗传多样性的策略:1.实施就地保护和迁地保护策略:2.建议在居群间进行植株和幼苗移栽,以提高居群间的基因交流,以最大限度保护羊踯躅的遗传多样性;3.保护和重建羊踯躅居群的适宜环境。
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