【摘 要】
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鉴定调控蛋白在基因组上的结合位点对于研究蛋白质-DNA的相互作用以及鉴定调控蛋白的靶基因具有重要意义。本论文首次建立了应用紫外激光交联/免疫沉淀技术筛选与蛋白质结合
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鉴定调控蛋白在基因组上的结合位点对于研究蛋白质-DNA的相互作用以及鉴定调控蛋白的靶基因具有重要意义。本论文首次建立了应用紫外激光交联/免疫沉淀技术筛选与蛋白质结合的特异性DNA片段的一套方法，以酿酒酵母热激因子(HSF)为例，利用该技术已成功地分离获得HSF结合的DNA片段，并对其调控的下游靶基因进行了分析鉴定。主要研究结果如下：
1.利用紫外激光交联/免疫沉淀技术已分离出20个HSF体外结合的DNA片段。进一步利用染色质免疫共沉淀技术鉴定出HSF在体内与其中7个DNA片段结合。
2.HSF与其中的两个片段4，6是组成型结合，与其中的五个DNA片段2，3，5，7，8是热逆境诱导型结合。
3.将上述7个DNA片段调控的下游基因(逆境诱导表达)推定为HSF靶基因，它们是：YNL193W、YNL195C、YNL196C、PPM1、PPZ2、YMR027W、PEX12、GTT2、YLL058W、COQ6、MRS2、VHT1、SPT4。YNL193W为已报道的HSF靶基因，其余基因是本论文首次发现的HSF靶基因。这些靶基因功能涉及到耐渗透压、耐金属离子逆境(PPZ2)、耐氧化逆境(GTT2)、单加氧酶基因(COQ6)及Mg2+离子转运通道蛋白基因(MRS2)和一些功能未知的蛋白基因如PEX12、YMR027W、YLL058W、YNL193W、YNL195C和YNL196C等。
4.一个DNA片段可以调节一个基因簇，如DNA片段2调控下游基因YNL193W/YNL195C/YNL196C的表达、DNA片段3调控下游基因PPZ2/PPM1的表达、DNA片段4调控下游基因YMR027W/PEX12的表达、DNA片段5调控下游基因GTT2/YLL058W的表达，多个基因可能共同拥有某一相同调控区域，在逆境诱导下，HSF与其共有的调控区域结合调控一个基因簇基因的转录。
5.对上述7个DNA片段的序列分析发现，这些DNA片段均具有至少两个重复排列的HSEs核心序列“nGAAn”或“nTTCn”，每两个核心序列间的间隔碱基数目在0～9个之间。
这些研究结果对理解HSF调控机制，以及认识HSF调控的靶基因作用于耐逆境的生理生化途径具有显著意义。
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