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左金丸出自《丹溪心法·火六》,为辛开苦降的代表方剂。主治肝火胁痛、胃脘痛以及呕吐吞酸等症,一直为历代医家所沿用至今。2005年版《中国药典》一部记载,左金丸由黄连和吴茱萸以6:1比例配伍,二味粉碎以水泛丸制得。这种以原药材打粉入药的方式,使左金丸在临床上存在服用剂量大、质量难以控制等问题。因此,制备稳定、高效的左金丸标准提取物,并用较先进合理的技术来控制质量,能够提高该方临床用药的“安全、有效、可控”,使左金丸得到合理应用。为此,本文首先进行了吴茱萸的化学成分研究,在黄连、吴茱萸及左金丸质量评价与标准提取物制备研究中指标成分选择实验的基础上,对黄连、吴茱萸、左金丸标准提取物的制备工艺与质量标准进行了研究。
从吴茱萸中分离、鉴定了12个化合物,包括4个生物碱类：吴茱萸碱(evodiamine)、吴茱萸次碱(rutaecarpine)、去氢吴茱萸碱(dehydroevodiamine)、1-甲基-2-十一烷基-4(H)-喹诺酮(1-methyl-2-undecyl-4(1H)-quinolone);3个柠檬苦素类：吴茱萸苦素(rutaevine)、柠檬苦素(limonin)、石虎柠檬素A(shihulimonin A);2个酚类：(+)-儿茶素((+)-catechin)、金丝桃苷(hyperin),2个植物甾醇和1个二十八烷醇。其中(+)-儿茶素为属内首次发现的化合物。
中药大多数以口服形式为主,其中的化学成分经过胃肠道的吸收进入体内,随着血液的运输到达各个组织脏器和靶器官而发挥疗效。能够被胃肠道吸收入血,生物利用度高的成分才可能是真正的有效成分。以黄连、吴茱萸及左金丸中的化学成分在动物体内的入血吸收和组织分布特点为指导,并结合化学物质基础研究及现代药效学研究文献来确定中药材及标准提取物质量评价中的指标成分,全面真实地反映药材及标准提取物的内在质量,对药材及标准提取物的质量进行准确评价,合理地进行中药标准提取物制备工艺及质量标准研究。通过动物体内吸收与分布特征实验,确定了黄连药材及标准提取物的质量评价指标成分为盐酸黄连碱、盐酸巴马丁、盐酸小檗碱,吴茱萸药材及标准提取物的质量评价指标成分为柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱,左金丸标准提取物的质量评价指标成分为盐酸黄连碱、盐酸巴马丁、盐酸小檗碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱。
中药材的质量优劣直接影响其提取物的质量及其在临床的疗效。中药标准提取物是在中药材的基础上对特定活性成分进行富集或定量配置,以期达到相应的要求或目的。因此,本文对黄连和吴茱萸药材的品质进行评价,以充分、准确了解中药材的质量情况,对中药标准提取物研究提供前提与依据,以更好地进行中药标准提取物的制备工艺与质量标准研究。
黄连的品质评价研究中改进了2005年版《中国药典》中黄连的含量测定方法,采用HPLC法代替TLC法,增加了含量测定指标,以更加全面、准确反映黄连药材的质量,修订了黄连药材的质量标准。吴茱萸的品质评价研究中改进了2005年版《中国药典》中吴茱萸的含量测定方法,包括改进了供试品溶液的制备方法、增加了含量测定指标、简化了HPLC法中的流动相组成等,修订了吴茱萸的质量标准。并且进行了商品吴茱萸药材的色谱研究,考察了市场上商品药材的质量情况,为进一步进行吴茱萸及左金丸的标准提取物研究提供前提基础。
本文采用正交实验设计法,以浸膏得率、指标成分在浸膏中的总含量以及指标成分总转移率三者的综合加权评分为总指标,全面反映标准提取物的质量,进行标准提取物的质量评价,对黄连、吴茱萸、左金丸的标准提取物制备工艺中乙醇浓度、提取时间、溶剂用量等因素进行考察,确定标准提取物制备中的各个参数,优化三者标准提取物的提取制备工艺。确定黄连标准提取物的制备工艺为6倍量60％乙醇提取3次,每次1 h,药材无需浸泡；吴茱萸标准提取物制备工艺为10倍量80％乙醇提取1 h,提取3次,药材为原药材果实颗粒不粉碎。左金丸标准提取物的制备工艺研究建立在黄连标准提取物与吴茱萸标准提取物制备工艺研究基础之上,确定优化的制备工艺为10倍量80％乙醇提取3次,每次1 h。
按照所优化的标准提取物提取制备工艺进行放大实验,验证所确定的标准提取物制备工艺的可行性,并制备出三者的标准提取物。依照提取物入血吸收与组织分布特征所选择的指标成分进行定性定量分析,采用多指标多靶点全面评价标准提取物的质量,拟定黄连、吴茱萸及左金丸标准提取物的质量标准,使标准提取物合理、安全、有效地应用于临床。