论文部分内容阅读
肾间质纤维化几乎是各种慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）发展到终末期肾衰竭（end-stage renal disease,ESRD）的共同途径。细胞外基质（extracellular matrix,ECM）大量堆积等多种致病因素在肾间质纤维化发生和发展过程中起关键作用。近年来研究发现各种细胞促炎因子及炎性介质参与了肾间质纤维化的过程。氧化应激（oxidative stress）及其所介导的炎性反应在肾间质纤维化进程中起着重要作用,是影响CKD预后的重要因素。我们前期研究发现肾间质纤维化过程中病理改变符合中医“癥瘕”理论,而ECM在肾间质成分的合成增多和降解减少,氧自由基的产生增加与清除障碍之间的平衡失调也同样符合肾络癥瘕理论及聚散失衡病机。中药蝉花的有效成份与冬虫夏草相似,属优质虫草。我们前期研究表明蝉花有防治肾间质纤维化及抗衰老的作用,迄今已成为CKD临床与基础研究的热点。目的:本课题以CKD 3～4期患者和单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型为研究对象,观察CKD 3～4期患者中医证候分布特点以及蝉花对主要证型的治疗作用,并从临床研究与动物实验两方面探讨蝉花延缓CKD进展的疗效;进而基于对氧化应激与炎症反应两条通路的干预,阐明蝉花延缓肾间质纤维化的内在机制。方法:1.临床研究:以CKD3～4期患者为研究对象,探讨其中医证候的分布特点。对66例患者进行前瞻性随机对照研究,疗程为30天。留取两组患者治疗前后血清标本,分析其治疗前后肾功能、肾小球滤过率、肝功能、血常规、24小时尿蛋白定量、血清炎性因子IL-6及TNF-α的变化。2.动物实验:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、蝉花组、虫草组、贝那普利组。采用单侧输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎。术后14天采集大鼠血清和尿标本,并处死动物,留取手术侧肾脏组织待检。肾脏病理切片采用HE、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理学变化;免疫组化检测大鼠肾组织α-SMA、FN、NF-κB、MCP-1、TNF-α表达;RT-PCR检测NADPH氧化酶p22phox mRNA表达。同时检测大鼠血清肌酐（Serum creatinine,Scr）、尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）、血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和24h尿蛋白定量。结果:1.临床研究（1）CKD患者基线情况:两组患者治疗前的性别、年龄、病因分布、CKD分期、中医证候分布、血压、肾功能、肝功能、血脂、血红蛋白、24小时尿蛋白定量、肾小球滤过率等均无显著性差异。（2）蝉花对CKD临床指标的影响:①治疗前后自身比较,对照组24小时尿蛋白定量在疗程结束时显著低于治疗前,其他各项临床指标均无显著差异;治疗组的血肌酐、血尿素氮、血尿酸、24小时尿蛋白定量治疗后均显著低于治疗前。②两组治疗后比较,治疗组的血肌酐、血尿素氮显著低于对照组,肾小球滤过率显著高于对照组,24小时尿蛋白定量无显著差异。（3）蝉花对CKD血清炎性因子的影响:①两组治疗前比较,治疗组血清IL-6水平显著高于对照组,两组间血清TNF-α水平无显著性差异。②治疗前后自身比较,对照组血清IL-6、TNF-α水平治疗前后无显著性差异,治疗组血清IL-6、TNF-α水平治疗后显著低于治疗前。③两组治疗后比较,治疗组与对照组血清IL-6、TNF-α水平无显著性差异。（4）CKD3～4期中医证候分布特点及蝉花对其主要证型临床指标的影响:①CKD3～4期患者的中医证候特点是正虚为之本,邪实为之标,主证以脾肾气虚为最常见,兼证以瘀血和湿热证为最常见。②蝉花分别对脾肾气虚、瘀血、湿热证型的肾功能相关指标的影响:治疗前后比较,对照组脾肾气虚、瘀血、湿热证型的肾功能指标前后均无显著性差异,24小时尿蛋白定量均显著低于治疗前。治疗组脾肾气虚、瘀血、湿热证型的Scr、BUN及24小时尿蛋白定量治疗后均显著低于治疗前;治疗后比较,治疗组脾肾气虚、瘀血、湿热证型的Scr、BUN分别显著低于对照组脾肾气虚、瘀血、湿热证型,肾小球滤过率显著高于对照组脾肾气虚、瘀血、湿热证型。治疗组分别于治疗组脾肾气虚、瘀血、湿热证型相比,各临床指标均无显著性差异。③蝉花分别对脾肾气虚、瘀血、湿热证型血清炎性因子的影响:治疗前后比较,对照组脾肾气虚、瘀血、湿热证型血清IL-6、TNF-α治疗前后均无显著性差异,治疗组脾肾气虚、瘀血、湿热证型血清IL-6、TNF-α治疗后显著低于治疗前;治疗后比较,治疗组脾肾气虚、瘀血、湿热证型与对照组脾肾气虚、瘀血、湿热证型以及治疗组分别相比均无显著性差异。2.动物实验（1）蝉花对UUO大鼠疗效的影响:蝉花组UUO大鼠的血肌酐、血尿素氮、24小时尿蛋白定量的水平显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠的血肌酐、血尿素氮显著低于贝那普利组,24小时尿蛋白定量与贝那普利组比较无显著性差异。（2）蝉花对UUO大鼠肾间质纤维化的影响:蝉花组UUO大鼠的肾小管损伤数目、肾间质纤维化程度显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组相比无显著性差异,蝉花组UUO大鼠的肾间质纤维化程度显著低于贝那普利组,肾小管损伤数目与贝那普利组比较无显著性差异;蝉花组UUO大鼠肾组织α-SMA表达显著高于假手术组,同时显著低于模型组与贝那普利组,与虫草组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠肾组织FN表达显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异。（3）蝉花对UUO大鼠肾组织炎症反应的影响:蝉花组UUO大鼠肾组织NF-κB表达显著显著低于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠肾组织MCP-1表达显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠肾组织TNF-α表达显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异。（4）蝉花对UUO大鼠肾组织及血清氧化应激的影响:蝉花组UUO大鼠的血清MDA水平显著高于假手术组,同时显著低于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠的血清SOD水平显著低于假手术组,同时显著高于模型组,与虫草组、贝那普利组相比无显著性差异;蝉花组UUO大鼠肾组织p22phox mRNA表达显著显著低于模型组,与假手术组、虫草组、贝那普利组相比无显著性差异。模型组与假手术组比较,模型组p22phoxmRNA表达显著升高。结论:蝉花治疗能够降低CKD3～4期患者及UUO大鼠血清肌酐、尿素氮,减轻UUO大鼠肾小管损伤及肾间质纤维化,从而延缓CKD进展。其机制很可能是通过减低炎症介质释放,纠正氧自由基的产生与清除之间平衡失调,改善氧化应激而发挥作用。而且,蝉花延缓CKD的作用机制与肾络癥瘕的理论以及聚散失衡的病机恰然相合。