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一.研究目的本实验通过探讨200mmol/L,400mmol/L,600mmol/L Na+三种浓度高渗盐水(HS)和乳酸钠林格氏液(LR)对严重烫伤大鼠伤后8小时补充上述液体进行复苏治疗,分别从血钠、炎症因子反应、氧化应激、肺组织细胞病理形态、炎症信号转导通道五个方面探讨三种不同浓度的高渗钠盐水(HS)对严重烫伤大鼠早期肺损伤的影响。二.研究方法40只体重在200-250g的雌性普通型SD大鼠从安徽医科大学实验动物中心购买所得。将所有大鼠编号后,采用随机抽取分成五组:对照组(8只)、LR组(8只)、HS200组(8只)、HS400组(8只)、HS600组(8只)。所有大鼠水合氯醛麻醉后剃去背部毛发,尾静脉置套管针,假伤组大鼠不做任何处理,拟伤后直接处死取腹主动脉血及肺组织;所有烫伤组大鼠均在背部予以30%深Ⅱ°至Ⅲ°开水烫伤,伤后分别使用相应的LR和HS进行液体复苏治疗。LR组和各HS组大鼠均在补液8小时后处死取腹主动脉血及肺组织。第一部分:三种不同浓度高渗盐水对严重烫伤大鼠伤后8小时血清钠离子及炎性因子的影响取出五组大鼠的一部分血清,使用自动生化仪检测血中钠离子含量。血中炎性因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)以及白介素17(IL-17)均采用酶联免疫吸附法(ELISA)测量所得。随后统计学分析实验所取得结果。第二部分:三种不同浓度高渗盐水对严重烫伤大鼠伤后8小时肺组织氧化损伤及肺组织形态的影响将低温冰箱冻存的五组大鼠的肺组织部分取出,肺组织丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活力值均采用比色法测量所得,将数据进行统计学分析。取部分肺组织在10%甲醛中固定、切片,然后采用苏木精伊红(HE)染色法观察肺组织细胞形态及病理变化。第三部分:三种不同浓度高渗盐水对严重烫伤大鼠伤后8小时肺组织p38MAPK及ERK通道活化的影响取出部分低温冰箱冻存的五组大鼠的肺组织,采用蛋白质印迹法(Western Blot)测定各组大鼠肺组织中p38MAPK以及ERK通道磷酸化比值并将数据进行统计学分析。三.结果第一部分血清钠:伤后8小时,与假伤组相比,LR组血清钠是明显降低的(P<0.01);而三个HS组无明显差异(P>0.05);与LR组相比,三个HS组血清钠均是明显升高的(P<0.01);与HS200组相比,HS400组及HS600组血血清钠均明显升高(P<0.01),而HS400组、HS600组之间血清钠未见显著变化(P>0.05)。炎性因子:伤后8小时,与假伤组相比,LR组和各个HS组TNF-α值均明显升高(P<0.01);与LR组相比,各个HS组TNF-α值均明显降低(P<0.01);与HS400组相比,HS200组和HS600组TNF-α值均明显升高,而HS200组、HS600组TNF-α值未见明显改变(P>0.05);与假伤组相比,LR组和各个HS组IL-6值均显著升高(P<0.01);与LR组相比,HS200组、HS400组IL-6值均显著降低(P<0.01),而HS600组无显著差异(P>0.05);与HS400组相比,HS200组IL-6值显著升高(P<0.01);与假伤组相比,LR组和各个HS组IL-17值均显著升高(P<0.01);与LR组相比,各个HS组IL-17值均显著降低(P<0.01),而HS200组、HS400组和HS600组IL-17值均无显著差异(P>0.05)。第二部分氧化应激指标:伤后8小时,LR组和各个HS组肺组织与假伤组相比,其MDA含量均明显升高而SOD活性均明显降低(P<0.01);与LR组相比,各个HS组MDA含量均明显降低而SOD活性均明显升高,有统计学差异(P<0.01);与HS400组相比,HS200组、HS600组MDA含量明显升高SOD活性明显降低(P<0.01),而HS200组和HS600组无明显统计学差异(P>0.05)。肺组织HE染色显示:假伤组大鼠为正常肺组织,LR组大鼠在伤后8小时肺间隔明显增厚,间质血管充血,同时血管周围可见中性粒细胞聚集,而三个HS组大鼠肺组织上述病理变化均减少,以HS400组病理变化最小,与正常肺组织基本相近。第三部分肺组织p38MAPK活性比较:伤后8小时,与假伤组相比,LR组和各个HS组肺组织p38MAPK通道活性明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01);与LR组相比,HS200、HS400组及HS600组p38MAPK通道活性均明显下降,(P<0.01);且HS400组p38 MAPK活性均明显低于HS200组及HS600组,而HS200组及HS600组p38 MAPK活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织ERK活性比较:与假伤组相比,伤后8小时LR组和HS600组肺组织ERK活性均明显增加(P<0.01);与LR组相比,HS200组、HS400组及HS600组ERK活性均显著下降,(P<0.01);同时HS200组、HS400组ERK通道活性均明显低于HS600组,而HS200组和HS400组之间ERK活性未见显著变化(P>0.05)。四.结论(1)与伤后使用LR复苏治疗相比,使用浓度200mmol/l、400mmol/l、600mmol/l HS进行液体复苏均能快速改善严重烫伤后的大鼠早期低钠血症及调节炎症反应失衡,抑制体内炎症细胞因子大量释放,进而减轻炎症反应,其中以400mmol/l HS补液效果最好。(2)与伤后使用LR复苏治疗相比,使用浓度200mmol/l、400mmol/l、600mmol/l HS进行液体复苏均能减少严重烫伤大鼠伤后早期肺组织的氧自由基的大量生成及减轻肺组织形态结构的损伤,其中以400mmol/l HS治疗效果最佳。(3)与伤后使用LR复苏治疗相比,使用浓度200mmol/l、400mmol/l、600mmol/l HS进行液体复苏均能不同程度抑制严重烫伤大鼠早期肺组织中p38MAPK和ERK通道的大量激活,进而减轻机体损害,其中以400mmol/l HS补液效果最好。