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研究背景多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是严重威胁人类健康的造血系统恶性疾患，其发生发展与骨髓瘤细胞的异常增殖和微环境的血管生成密切相关，骨髓瘤细胞增殖比例低以及对多种药物耐药的形成，使得MM的临床治疗仍十分困难。Notch信号通路与MM的发生具有密切的联系，骨髓瘤细胞和骨髓瘤基质细胞表达大量Notch受体和配体，激活Notch信号通路对骨髓瘤的发生和耐药起重要作用。Akt与多种肿瘤的发生发展密切相关，有学者报道Notch信号和PI3K/Akt通路可相互激活。γ-分泌酶抑制剂（gamma secretase inhibitor，GSI）能够有效抑制Notch1的激活，近期多数研究报道蛋白酶体抑制剂诱导MM细胞株凋亡的同时伴有Notch1表达的降低，用GSI阻断Notch1可降低Akt的表达，促进肿瘤细胞的凋亡。因此，我们利用GSI下调Notch表达深入探讨Notch1及Akt在MM小鼠模型中的作用及其机制。研究目的研究GSI抑制Notch1及Akt的激活对肿瘤的增长、细胞因子分泌等生物学行为的影响和肿瘤血管生成的改变，探讨Notch1及Akt在MM小鼠模型中的作用及其机制。将为MM的靶向治疗提供理论依据和实验室基础。研究方法1.体外培养MM细胞株RPMI8226，将人骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞通过皮下注射接种于糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠，建立异体移植动物模型。2.连续监测骨髓瘤细胞在小鼠体内的生长情况，观察肿瘤的大小变化。3.分别应用GSI、生理盐水瘤内注射各一组小鼠（9只），观测实验组（GSI组）、对照组（生理盐水组）肿瘤增长的变化。4.免疫组织化学方法：分离、摘除小鼠皮下瘤块，用10%甲醛固定、石蜡包埋并进行苏木精-伊红染色；免疫组织化学方法检测Notch1、Akt表达及定位。5.Western blot检测通路相关蛋白表达情况：分离、摘除小鼠皮下瘤块，液氮研磨后，提取细胞总蛋白，Western blot检测Notch1、Akt蛋白的表达情况。研究结果1.成功建立于糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠异体移植动物模型。2.移植成瘤率：接种骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞5-14天（平均7天）后，18只NOD/SCID小鼠左侧或右侧腹股沟区均见可测肿块，成瘤后第3天平均体积为5.26mm3，第6天平均体积为66.76mm3，第9天平均体积为274.48mm3，第12天平均体积为510.26mm3，成瘤率100%。3.实验动物的一般状况：对照组（生理盐水组）NOD/SCID小鼠随着肿瘤体积的增大精神逐渐萎靡、活动减少、皮肤光泽度差、饮食饮水量减少；而实验组（注射GSI药物）小鼠精神状态、活动皮肤光泽、饮水、饮食量优于对照组；检测肿瘤体积变化结果表明GSI可抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞荷瘤NOD/SCID鼠移植肿瘤在体内的生长。在骨髓瘤小鼠模型中，实验组移植瘤平均体积（683.5mm3）较对照组（1798.7mm3）明显减小，p＜0.01。4.肿瘤免疫组化方法检测Notch1、Akt定位及表达：Notch1定位于细胞膜、细胞胞浆或胞核内，Akt主要定位于细胞胞浆，其次定位于细胞膜或细胞核。实验组和对照组Notch1阳性率分别为11.1%和95.6%， Akt阳性率分别为13.3%和93.3%，实验组Notch1及Akt较对照组表达明显减少。5.Western blot结果显示：实验组Notch1基因及Akt基因蛋白质的表达明显低于对照组，提示GSI可抑制Notch1、Akt蛋白的表达。结论1.通过多发性骨髓瘤移植瘤动物实验证实GSI可下调Notch信号通路中Notch1的表达和Akt分子表达。2.GSI通过下调Notch1、Akt的表达，达到抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞荷瘤NOD/SCID鼠移植瘤的增长。3.Notch信号通路有望成为骨髓瘤抗肿瘤治疗的新靶点。