【摘 要】
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随着对儿童单纯性肥胖症研究的不断深入,我们深刻的感受到儿童单纯性肥胖症相对于成人肥胖最大的区别在于肥胖的消长多样性问题,而儿童期肥胖相关基因的特异性表达是决定儿童
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随着对儿童单纯性肥胖症研究的不断深入,我们深刻的感受到儿童单纯性肥胖症相对于成人肥胖最大的区别在于肥胖的消长多样性问题,而儿童期肥胖相关基因的特异性表达是决定儿童单纯性肥胖症消长多样性的根本因素.因此,寻找儿童期单纯性肥胖症特异表达基因对探索儿童单纯性肥胖症的分子机制和研究消长多样性问题具有重要意义.方法:1优化荧光标记mRNA差异显示技术的反应条件.2利用该技术分离正常儿童与轻、中、重度肥胖组儿童腹部皮下脂肪组织的差异表达基因片段.3从所获差异表达片段中选择感兴趣的片段,进行再扩增、回收.4将上述片段克隆入pMD18-T载体,EcoRI和HindIII双酶切鉴定.5进行测序分析,通过BlastN、BlastX与GenBank数据库进行同源性比较.6对感兴趣片段进行Northern Blot分析鉴定.结论:1优化了荧光标记mRNA差异显示的反应条件,使所选引物与样本具有更高的匹配度,扩增条件更适宜,扩增条带清晰、差异明显、可比性好.2发现6条与人类儿童单纯性肥胖症相关的差异表达基因片段,并建立相应的克隆.对其中两个片段进行了Northern blot证实.3测序分析和同源性比较显示这些cDNA均为未知功能基因片段.首次发现这些序列所在基因可能与人类儿童单纯性肥胖症疾病相关.
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