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马病毒性动脉炎(Equine viral arteritis,EVA)是由马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)引起的一种马属动物的传染病。为了建立能够快速、定量检测EAV的病原学方法,本研
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马病毒性动脉炎(Equine viral arteritis,EVA)是由马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)引起的一种马属动物的传染病。为了建立能够快速、定量检测EAV的病原学方法,本研究应用两株抗EAV N蛋白的单克隆抗体(2B3和2B9)建立了在蛋白水平定量检测EAV的抗原捕捉ELISA (AC-ELISA)方法。结果表明,该方法对EAV的最低检出限为3.86 TCID50,特异性良好,与马属动物常见病毒不发生交叉反应,3次重复试验测定表明该方法稳定性高。同时本研究通过对EAV (Bucyrus株)基因组ORF7设计一对特异性引物,应用新型染料Eva Green建立了能够在核酸水平定量检测EAV的RT-PCR方法,结果表明,当病毒载量在102～107拷贝/μL时,应用该方法测得的Ct值与EAV病毒含量具有良好的线性关系,该方法能够检测出的最低EAV滴度为101.5TCID50/mL,对标准质粒的检出限为10拷贝/μL,经三次组内和组间重复试验测定,106、104、102拷贝/μL的标准质粒测得的Ct值的变异系数全部小于2%,表明该方法重复性良好。本研究建立的这两种检测方法为实验室开展EAV病原学研究奠定了良好的实验基础。
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