荔枝AP1、CDPK同源基因的克隆及表达研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jeffyi2009
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荔枝(Litchi chinensis Sonn.)属于无患子科(Sapindaceac)荔枝属(Litchi)植物,广泛分布于热带和亚热带地区,在我国华南地区普遍种植。大部分荔枝品种都存在“大小年”结果现象,这严重影响了我国荔枝产业的发展。而与大小年现象直接相关的是成花。开花是高等植物生活史中一个重要的生理现象,研究成花机理不但在植物发育生物学上具有重要的理论意义,而且对农业生产具有巨大的应用价值:诱导植物开花,既有利于加速育种进程,又能为产期调节提供便利条件,而且如果能对成花进行调控,则将为提高作物的产量和品质做出贡献。   本实验以‘糯米糍’和‘妃子笑’荔枝花芽为试验材料,从荔枝成花的分子生物学基础方面入手,进行了荔枝相关基因的克隆与表达方面的研究。以期揭示荔枝的开花机理,为提高荔枝的成花率、克服荔枝“大小年”结果现象提供理论依据。   本研究主要结果如下:   l、针对荔枝花芽含多糖类物质多,易褐化的特点,对这一多年生木本植物的花芽提取方法进行了研究,摸索出了有效的RNA的提取方法。其中,RNA提取的关键是在研磨时加入PVP,提取液中加入β? 巯基乙醇,多次抽提并加以LiC1沉淀。利用这些方法提取出的荔枝花芽RNA质量较高,能满足一般分子生物学试验的要求。   2、采用RT-PCR的方法对荔枝的成花相关基因APETALAI(LcAPI)进行了克隆。得到了该基因片段和3’端序列,该基因是荔枝上克隆到的第一个MADS-box基因家族的基因。另外还利用该方法克隆到了荔枝钙依赖蛋白激酶的基因calcium-dependent protein kinase(CDPK)片段和3’端序列。   3、采用Northern杂交的方法研究了荔枝AP1、CDPK同源基因的表达和荔枝花芽分化进程之间的关系。两种基因都是在出现“白点”(花序原基)前有所表达,随着花芽分化的进程表达逐渐增强。   4、采用Northern杂交的方法研究了NO和H202对LcAP1和LcCDPK基因表达的影响,结果显示NO和H202对这两种基因的表达有增强的作用。   5、研究了脱落酸和乙烯利对荔枝成花的影响。结果表明,脱落酸具有促进荔枝成花的作用,30mg/L ABA为最适宜浓度;乙烯利则没有促进成花基因的表达。试验不仅从生理角度进行了验证,还从分子角度进行了讨论和分析。   6、研究了钙离子在荔枝成花过程中所起的作用。结果表明,Ca2+参与了荔枝成花基因的表达。NO促进LcAP1和LcCDPK的表达依赖钙离子,而H202不依赖钙离子;ABA促进LcAP1和LcCDPK的表达依赖钙离子。
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