厌氧菌性角膜炎的实验研究

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本文由三部份组成: 一.眼部厌氧菌感染的病原学研究 目的:对疑似厌氧菌眼部感染的患者标本进行厌氧菌分离培养,为厌氧菌性角膜炎的进一步研究提供厌氧菌菌株来源。 方法:采集31例怀疑有厌氧菌眼部感染的患者标本,接种于CM0972厌氧培养基及硫乙醇酸盐液体培养基中,利用厌氧罐于35~37℃恒温培养箱中进行厌氧培养,并对厌氧培养阳性菌落进行耐氧试验。通过形态染色、RAPID32A生化反应系统对培养48小时的厌氧菌纯菌落进行鉴定;通过微量肉汤稀释法测定抗菌药物对其最小抑菌浓度。 结果:31例厌氧培养标本中,培养阳性7例,3例分离自泪囊炎、4例分离自角膜炎患者,平均培养6天长出菌落,经鉴定均为痤疮丙酸杆菌。该菌为革兰染色无芽孢厌氧杆菌,CM0972厌氧培养基中形成灰白色、圆形、不透明菌落,液体培养基中呈絮状混浊。微量肉汤稀释法测定结果为:痤疮丙酸杆菌对甲硝唑、克林霉素、青霉素G及左氧氟沙星不敏感,对头孢哌酮、氧氟沙星敏感。 结论:厌氧菌在普通条件下难于生长,厌氧环境中可在特殊培养基上缓慢生长,痤疮丙酸杆菌菌对常规抗厌氧菌药物不敏感。本实验为厌氧菌性角膜炎的进一步研究提供了菌株来源。 二.兔厌氧菌性角膜炎的病理过程观察及致病机制的初步研究 目的:观察兔厌氧菌性角膜炎的的病理特点及免疫反应,并初步探讨细胞因子TNF-α、IL-8在该种感染中的作用。 方法:新西兰白兔25只,随机分为术后5天、8天、12天、17天、23天组5组;每组5只,并随机选取1只作为对照。术前7天结膜下连续注射地塞米松2mg,术眼角膜基质内分别注射痤疮丙酸杆菌悬液及生理盐水0.2ml建立实验组与对照组的动物模型,对其临床表现进行观察。术后第2天行术眼角膜刮片染色、厌氧培养。并分别于术后5天、8天、12天、17天、23天处死各组动物,钻取术眼角膜,其中1/2行病理学HE染色及抗CD4+、CD8+单克隆抗体免疫组化染色,观察兔角膜组织的病理改变及免疫反应情况;1/2研磨成为角膜匀浆,离心后取上清液,ELISA方法测定其中细胞因子TNF-α、IL-8的含量,沉淀物进行厌氧培养以分离痤疮丙酸杆菌。 结果:兔角膜基质内注射痤疮丙酸杆菌所致厌氧菌性角膜炎主要表现为局限性角膜基质浸润伴有周围组织水肿,后期出现角膜新生血管。病理学检查结果显示:嗜酸性粒细胞为该种感染的主要炎症细胞且经历两个明显的波峰,分别于术后8天及术后17天至峰值,角膜病灶周围组织内同时伴有单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞浸润,淋巴细胞数量在病变后期增加。免疫组化结果显示:病变过程中,存在CD4+、CD8+细胞阳性表达,且CD4+T淋巴细胞阳性表达强于CD8+T淋巴细胞。细胞因子测定结果为:兔角膜组织中TNF-α及IL-8含量在发病初期升高,之后逐渐下降,至第12天达最低值;随角膜新生血管的出现,两种细胞因子在角膜组织中的表达再次逐渐升高,第17天达最高峰,随后逐渐下降至对照组水平。角膜组织内TNF-α、IL-8的含量变化与感染的临床表现相一致。 结论:通过兔角膜基质内注射痤疮丙酸杆菌悬液,可成功制作厌氧菌性角膜炎的动物模型。该种感染主要表现为局限性角膜基质内浸润伴周围组织水肿,后期角膜新生血管形成。嗜酸性粒细胞参与了病变的炎症反应过程,TNF-α、IL-8参与的、T淋巴细胞介导的免疫反应在痤疮丙酸杆菌性角膜炎中发挥了重要作用。痤疮丙酸杆菌所致角膜感染的临床特点及具体的致病机制尚有待于进一步研究。 三.厌氧菌性角膜炎4例临床分析 目的:通过4例患者的临床分析,探讨厌氧菌性角膜炎的临床特点。 方法:对2004年11月至2005年12月之间诊治的4例厌氧菌性角膜炎患者的临床表现、治疗及相关危险因素进行回顾性分析。 结果:厌氧菌性角膜炎4例(男性3例,女性1例),平均年龄51.75岁。4例患者分离厌氧菌均为痤疮丙酸杆菌,临床表现多为慢性迁延性角膜基质局限性浸润水肿,多为混合感染或继发性感染,局部2%甲硝唑联合左氧氟沙星治疗有效,必要时需联合其他药物或手术治疗。激素应用史及类天疱疮病、酒渣鼻等其他眼部病变可能为本病的危险因素。 结论:目前国内尚未见厌氧菌性角膜炎的病例报道,慢性迁延性角膜基质局限性浸润水肿应考虑到厌氧菌感染的可能性,厌氧菌培养可明确诊断,激素应用史及类天疱疮病、酒渣鼻等其他眼部病变可能为本病的危险因素。
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