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猫omega型干扰素(FeIFN-ω)是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫增强作用的细胞因子。本实验首先从被病毒感染的死亡家猫脾脏中提取总RNA为模板，通过RT-PCR的方法克隆出家猫干扰素ω型基因，然后将所扩增出来的基因去除信号肽区，只保留成熟蛋白区基因，重新设计含有BamHI和NheI酶切位点的一对特异性引物进行基因扩增，所得到的PCR产物纯化回收后，经BamHI和NheI双酶切，插入含有麦芽糖分泌结合蛋白(MBP)的pMBP-P表达载体，并转化大肠杆菌TOP10F感受态细胞，用含氨苄青霉素(Amp)的LB平板，筛选阳性克隆，并对重组子进行BamHI和NheI双酶切鉴定、PCR鉴定和测序鉴定。鉴定后的重组基因工程菌株，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白以可溶形式在细胞周质空间中得以表达。随后，采用Ni-NTA亲和层析纯化FeIFN-ω，再经SDS-PAGE电泳和WesternBlot检测，分析纯化的重组蛋白。最后采用猫肾上皮细胞(CRFK)-滤泡性口炎病毒(VSV)系统按照细胞病变抑制法测定FeIFN-ω的抗病毒效价(TCID50)。
结果表明，本研究成功克隆了猫omega型干扰素基因，其全长591bp，编码196个氨基酸序列，其中1-23位氨基酸为信号肽区，24-196位氨基酸为成熟蛋白区。缺少信号肽的基因序列全长519bp，编码173个氨基酸。所构建的质粒pMBP-P/FeIFN-ω在大肠杆菌TOP10F基因工程菌的细胞周质空间中以可溶形式成功表达了分子量约为20kD的目的蛋白，再加上载体本身携带的MBP蛋白(约45kD)，共约65kD。SDS-PAGE检测和Western-Blot分析都显示纯化的重组蛋白为65kD的融合蛋白。将纯化处理后的蛋白加入猫肾上皮细胞，用滤泡性口炎病毒攻毒，测出重组FeIFN-ω具有抗病毒作用，其生物学活性约为4.6×106IU/mg。
本研究的完成，为生物工程制备生产猫重组干扰素打下坚实的基础。