【摘 要】
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新城疫病毒(NDV)引发的新城疫(ND)是禽类的一种接触性、烈性传染病,发病急,感染率和死亡率高,给养禽业带来严重的经济损失。NDV表面的血凝素-神经氨酸酶(HN)是主要的免疫保护
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新城疫病毒(NDV)引发的新城疫(ND)是禽类的一种接触性、烈性传染病,发病急,感染率和死亡率高,给养禽业带来严重的经济损失。NDV表面的血凝素-神经氨酸酶(HN)是主要的免疫保护性抗原,与病毒的毒力和致病性密切相关。从病鸡输卵管积液中分离了一株新城疫病毒(命名为SHY06),经蚀斑纯化后测定其鸡胚平均死亡时间和1日龄雏鸡脑内致病指数分别为52h和2.0,F蛋白裂解位点氨基酸序列为112-RRQKRF-117,符合强毒NDV的特征。根据F基因(1~374bp)对SHY06和19个NDV参考毒株进行基因分型,结果表明SHY06属于基因Ⅶ型。F基因氨基酸序列同源性比较显示SHY06与基因Ⅶ型NDV分离株同源性为97.5%～99.5%,与基因IX型NDV(F48E9等)同源性为91.7%～92.4%,与基因II型(疫苗株LaSota等)同源性为89.2%。HN基因氨基酸序列同源性比较显示SHY06与近年来分离株同源性较高,为92.1%～99.7%,与疫苗株(LaSota)和标准强毒株(F48E9)同源性较低,分别为87.6%和89.9%。用两株针对新城疫病毒HN基因的单抗1E5和C3-B7检测NDV,均具有血凝抑制性(HI),免疫球蛋白亚类分别为IgG2a和IgG1。用HiTrap protein-A层析柱对这两株单抗进行了亲和纯化。收集不同洗脱阶段的液体进行蛋白含量测定,结果表明5mL的洗脱液洗脱后,第1~2mL洗脱液中单抗含量最高。用SDS-PAGE电泳对纯化产物进行纯度鉴定,结果表明单抗纯化后只有重链和轻链两条带。得到纯化的单克隆抗体后,课题组对单克隆抗体1E5进行了模拟抗原表位的筛选。利用噬菌体随机7肽库筛选新城疫病毒(NDV)HN蛋白的B细胞抗原位点。以NDV LaSota株HN蛋白的单克隆抗体(McAb)1E5为靶分子,采用噬菌体随机7肽库进行亲和筛选,经过三轮筛选后得到4组可用的7肽序列。同源性分析表明展示肽序列与HN蛋白的388~395位氨基酸具有较高的同源性,竞争ELISA实验证明筛选到的克隆能与病毒产生较为明显的竞争,证明它们的共有序列L * */* PNT是抗原表位的骨架结构。
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