论文部分内容阅读
目的：NR2B型NMDA（N-methyl-D-aspartate）受体在海马神经干细胞增殖中的作用及机制。
方法：在由新生24h大鼠海马分离获得的神经干细胞上，用免疫荧光细胞化学染色、Western blot和RT-PCR观察NMDA受体各亚单位的表达情况。分别加入NMDA受体的激动剂NMDA和NR2B亚单位的特异性拮抗剂Ro25-6981后，用CCK-8测定细胞活力和细胞球计数法来衡量神经干细胞的增殖情况；用Westernblot观察此过程中CaMKIV(CaM-dependent protein kinaseⅣ)和CREB(cAMPresponse element binding protein)蛋白的活化情况。最后用RNA干扰法观察CaMKIV基因沉默后对CREB活化及对神经干细胞增殖的影响。
结果：①海马神经干细胞上表达有NMDA受体的亚单位NR1和NR2B的蛋白和mRNA;②10μM的NMDA和20μM的Ro25-6981分别能够促进和抑制神经干细胞的增殖(P＜0.01);③神经干细胞上表达有CaMKIV和CREB蛋白及各自的活化形式pCaMKIV和pCREB;④激活NMDA受体后，CaMKIV和CREB的磷酸化比例增加（（P＜0.01）；反之，在加入Ro25-6981拮抗NR2B型NMDA受体后，二者磷酸化比例减少(P＜0.01);⑤用CaMKIVsiRNA基因沉默后，CREB的磷酸化比例相应减少(P＜0.01)，同时神经干细胞增殖减少(P＜0.01);NMDA和Ro25-6981对神经干细胞增殖的作用消失。
结论：NR2B型NMDA受体可以通过CaMKIV/CREB通路诱导海马神经干细胞的增殖。