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磷蛋白位于核糖体60S亚基上，亚基缺失和抑制实验证明，磷蛋白与蛋白质的合成密切相关。国外研究表明，猪囊虫磷蛋白能被囊虫病人血清抗体所识别，因此，猪囊虫磷蛋白是否可以用来作为诊断或预防免疫抗原，以及如何大量获得磷蛋白成为研究热点。本实验旨在选择巴斯德毕赤酵母表达系统(Pichia Pastoris Expression System)在体外大量表达磷蛋白，从而解决猪囊虫抗原来源困难的问题，并进一步研制成基因工程疫苗来预防猪囊虫病。首先用限制性内切酶将猪囊虫磷蛋白基因(P2)从重组克隆载体pGEM-P2中切下后与相应限制性内切酶酶切的穿梭载体pPIC9K相连接，构建了重组表达载体pPIC9K-P2，转化大肠杆菌JH109，筛选阳性克隆。经测序证明，基因序列完全正确，从而大量制备重组质粒pPIC9K-P2，并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化，然后分别电转化毕赤酵母菌种GS115，使重组表达载体与宿主酵母染色体发生同源整合，获得两种表型的重组菌株，分别为HIS~+MUT~+(甲醇利用快型) 和HIS~+MUT~s(甲醇利用慢型)。将所有在营养缺陷型选择培养基MD上生长出的转化子，采用G418抗性梯度法筛选，获得高拷贝整合菌株，PCR检测表明有目的外源基因的整合，重组菌株命名为GS115／pPIC9K-P2HIS~+MUT~+和GS115／pPIC9K-P2HIS~+MUT~s。然后对重组菌株利用甲醇进行诱导分泌表达，通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析，结果表明，磷蛋白基因在毕赤酵母中得到了成功表达，目的蛋白分子量大小为12.6KD左右，与预期的大小相吻合，而且能被抗囊虫人血清抗体所识别，表达量占总蛋白的33％。