国产白块菌微生物多样性及其在菌根合成中的应用

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国产白块菌—攀枝花块菌(Tuber panzhihuanense)子囊果及其菌塘微生物采用传统的可培养方法进行分离纯化后,用毛细管电泳(HPCE)对培养出的细菌16S rDNA V3高变区和真菌18S rDNA ITS1区进行筛选,得出子囊果内细菌155株,土壤内细菌184株、真菌74株。对细菌的16S rDNA和真菌的LSU进行测序获得了丰富的微生物信息量。子囊果内细菌分属于5个门11属和20个种,其中,最多的菌群为γ-变形菌门(γ-Proteobacteria)(49.68%),以Pseudomonas为优势属;其次为α变形菌门(α-Proteobacteria)(37.42%),以Phyllobacterium和Bradyrhizobium为优势属;厚壁菌门(Firmicutes)(7.44%)中Bacillus为优势类群;放线菌门(Actinobacteria)(3.22%)中的菌株分属于Microbacterium testaceum和Kineococcus xinjiangensis酸杆菌门(Acidobacteria)中Terriglobus roseus(1.94%)作为一种新分离到可培养细菌,在此前与块菌相关的细菌多样性中未见报道。菌塘土壤所分离到的细菌分属于6个门23属70个种,其中β变形菌门(β-Proteobacteria)所占比例最大(30.98%),Burkholderia为代表类群;其次,γ-变形菌门(28.8%)为第二大类群,以Pseudomonas为优势菌属;α-变形菌门(14.67%)中以Phyllobacterium myrsinacearum作为优势菌种;放线菌门(12.5%)中以Arthrobacter为代表属;厚壁菌门(7.6%)中Bacillus所占比例最大;拟杆菌门(Bacteroidetes)(5.43%)中所分离到的细菌均属于金黄杆菌属的Chryseobacterium ureilyticum。Pseudomonas、Stenotrophomonas、 Phyllobacterium、Bacillus和Brevibacterium五个属的细菌同时存在于子囊果及其菌塘中。菌塘土壤所分离到真菌的分属于3个门13个属23个种,其中子囊菌门(Ascomycota)(89.19%)占较大的比例,并以Penicillium为优势类群;此外,以Mucor为代表的接合菌门(Zygomycota)也是常见的类群。   此外,本文首次就三种国产白块菌菌根组合做了尝试,攀枝花块菌、T.cf.liyuanum、会东块菌(T.huidongense)分别与华山松(Pinus armandii)、板栗(Castanea mollissima)、锥连栎(Quercus franchetii)进行菌根合成实验,结果显示T.cf.liyuanum、会东块菌(T.huidongense)分别成功地与华山松形成菌根;会东块菌成功的与板栗形成菌根关系。在菌根合成试验中,通过不同的处理条件及水平对不同树种菌根数、菌根苗长势的影响做了统计,还对菌根数与菌根苗长势的相关性做了相关的数据分析。并就所合成的菌根进行了宏微观形态特征描述及分子生物学鉴定。   攀枝花块菌、会东块菌与华山松的菌根合成试验中,共同接种从攀枝花块菌子囊果及菌塘所分离到的优势细菌菌液,以筛选菌根促生菌,研究其对菌根量及菌根苗长势的影响。在菌根合成试验中分别用8种细菌菌液进行三个浓度的处理(0.8×109 cfu/mL、1.6×109 cfu/mL、2.4×109 cfu/mL)。结果显示,不同细菌种类对菌根量及菌根苗长势的影响差异显著,而同一种细菌的不同浓度对菌根形成量及菌根苗长势影响差异不显著;其中,假单胞菌(P.lurida、P.umsongensis)和伯克氏菌属(Burkholderia sediminicola)对菌根形成量及菌根苗的长势均有促进作用。嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的两个处理浓度(1.6×109cfu/mL、2.4×109 cfu/mL)以及节杆菌(Arthrobacter methylotrophus)的三个处理浓度对菌根形成均有极显著的抑制作用。其余细菌和浓度处理对菌根量及菌根苗长势影响不显著。
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