平地木中间苯二酚和总酚酸成分的研究

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平地木(Ardisia japonica(Thunb)Blume)系紫金牛科紫金牛属植物,又名矮地茶、叶下红,是常用中药材,全株及根可供药用。本实验对平地木的性状进行鉴定,并对组织形态进行显微鉴定,对平地木中水分、灰分和浸出物进行测定;对平地木全株中的化学成分进行提取、分离并鉴定分子结构;建立了高效液相色谱法测定平地木中2-甲基-5-[8′(顺)-十三烯基]-间苯二酚(化合物2)含量的方法;建立了分光光度法测定平地木中总酚酸含量的方法。性状和显微鉴定:选取新鲜的平地木全株,对其外观、形状等特征进行鉴定;选取平地木茎的横切面、叶片表面和粉末适量,于显微镜下观察,对其中的组织、细胞和内含物等形态特征进行判定。结果显示,平地木性状特征,茎的横切面,叶片表面,粉末中组织、细胞、内含物的特征与《中国药典》(2015版)中平地木的特征基本一致。平地木茎为圆柱形,根须疏松;茎表面为红棕色,纹络较细,有节点;叶互生,叶片为椭圆形,浅绿色。茎横切面的表皮细胞壁较厚,木栓层较多,皮层较厚,厚角细胞较多,陈列较为紧凑,木质部细胞多数完全木化,导管多为单行排列;叶片表面观的表皮细胞多为椭圆型,气孔多为不等式,少数为不定时;全草粉末为棕色,螺纹导管较多,分泌腔多数不完整,内含棕色分泌物,粉末中淀粉粒较少。水分、灰分和浸出物的测定:按照《中国药典》(2015版)第四部的方法,称取平地木适量,粉碎、过筛,将样品加热、干燥,称量,计算水分的含量;称取平地木适量,粉碎、过筛,加入去离子水,将平地木冷浸、静置一段时间,过滤提取液,并进行水浴加热,冷却至室温,称量,计算浸出物含量;称取平地木适量,粉碎,灼烧、冷却,称量,计算总灰分含量。结果显示,平地木中水分含量为7.20%;浸出物含量为15.92%;总灰分含量为6.29%。化学成分分离鉴定:选取平地木全株,粉碎,用无水乙醇浸泡、提取,提取物减压浓缩得膏状物,膏状物经硅胶、D101大孔吸附树脂、C18等多种色谱方法分离,制备色谱仪纯化,得到单体化合物,用MS、UV、IR、NMR等判定其分子结构。结果显示,从平地木全株中,得到了四种化学成分,分别为2-甲基-5-[10′(顺)-十五烯基]-间苯二酚(1),2-甲基-5-[8′(顺)-十三烯基]-间苯二酚(2),2-甲基-5-十三烷基间苯二酚(3),2-甲基-5-十五烷基间苯二酚(4)。化合物2含量测定:取平地木的根、茎、叶各适量,分别粉碎,过筛,石油醚回流提取,提取液分别过滤,旋蒸浓缩,甲醇定容。以自制的化合物2为对照品,高效液相色谱法测定;色谱柱为Wonda Sil C18 Superb色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(75∶25),流速为1 m L/min,检测波长为275 nm。结果显示,化合物2的线性范围为0.054~0.870 mg/m L;回归方程式为Y=17009C-317.67(r=0.9997);精密度RSD为0.48%;稳定性RSD为0.84%;加标回收率为102.59%。干燥平地木根、茎、叶中化合物2的含量分别为16.78mg/g、17.39 mg/g、19.56 mg/g。总酚酸含量测定:取平地木的根、茎、叶各适量,分别粉碎,过筛,无水乙醇超声提取,提取液过滤,旋蒸浓缩,无水乙醇定容;没食子酸为对照品,1%铁氰化钾-1%三氯化铁为显色剂,检测波长为760nm。结果显示,没食子酸的线性范围为0.16~0.96μg/m L;回归方程为A=0.8324C-0.0244(r=0.9999);精密度RSD为0.75%;稳定性RSD为0.73%;重复性RSD为0.51%、0.45%、0.55%;加标回收率为99.1%。干燥平地木根、茎、叶中总酚酸的含量分别为16.32 mg/g、21.13 mg/g、8.28 mg/g。从平地木中分离得到了四种化合物,均为间苯二酚类化合物,其中化合物1为新化合物,化合物2为已知化合物,化合物3和化合物4为平地木中首次发现。本实验建立了用高效液相色谱法测定化合物2的方法,石油醚为溶剂提取效率高,干扰少。测定结果显示,根、茎中含量较低,叶中含量较高。此方法简单、快速,有较高稳定性和准确度。本实验建立了用分光光度法测定总酚酸含量的方法。测定结果显示,根、茎中含量较高,叶中含量较低。此方法简便、快速,有较高准确度。
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