【摘 要】
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目的：初步探讨TGF-β1/H2O2增强Luminal-A型乳腺癌细胞T-47D的抗失巢凋亡潜能。 方法：（1）细胞培养：按照实验设计分组并在相应时间加入诱导因子或者信号通路抑制剂，收集细胞用于
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目的：初步探讨TGF-β1/H2O2增强Luminal-A型乳腺癌细胞T-47D的抗失巢凋亡潜能。 方法：（1）细胞培养：按照实验设计分组并在相应时间加入诱导因子或者信号通路抑制剂，收集细胞用于后续实验研究；（2）空白对照组与各实验组使用软琼脂集落形成实验和流式细胞仪检测Luminal-A型乳腺癌细胞T-47D的抗失巢凋亡能力；（3）Real-time PCR和Western blot用于检测抗失巢凋亡相关基因mRNA和蛋白质的表达水平；（4）Western blot检测与抗失巢凋亡相关的信号途径；（5）使用SNAI2 shRNA慢病毒载体转染T-47D细胞，沉默SNAI2的表达；（6）裸鼠尾静脉注射CFSE标记的肿瘤细胞T-47D，冰冻切片后，观察肺内转移的乳腺癌细胞滞留情况。 结果：（1）经过TGF-β1/H2O2诱导，流式细胞仪和软琼脂集落形成实验的实验结果显示，TGF-β1/H2O2组相对于control组、H2O2组、TGF-β1组发生凋亡的细胞百分数显著减少，同时计数多个视野取平均值后所得的细胞克隆数增多具有统计学意义；（2）经过H2O2、TGF-β1、TGF-β1/H2O2诱导后，TGF-β1/H2O2组相对于control组、TGF-β1组、H2O2组的TGF-βRⅡ、SNAI2和Bcl-2的表达上调具有显著统计学意义；（3）TGF-β1/H2O2通过ERK1/2的激活调节TGF-βRⅡ和SNAI2的表达；（4）在SNAI2 shRNA慢病毒载体沉默SNAI2表达后，Western blot检测发现TGF-β1/H2O2诱导后，Bcl-2和TGF-βRⅡ的表达上调被阻断；（5）与体外实验一致，裸鼠尾静脉注射CFSE标记的T-47D细胞后，TGF-β1/H2O2诱导可以显著增加获得抗失巢凋亡能力的T-47D肿瘤细胞外渗进入肺组织；（6）使用SNAI2 shRNA慢病毒载体沉默SNAI2的表达后，经过TGF-β1/H2O2诱导，TGF-β1/H2O2 SNAI2 shRNA组相对于control SNAI2 shRNA组形成的克隆数、凋亡细胞百分数及肺部滞留的细胞数没有显著性差异。 结论：TGF-β1/H2O2可以通过TGF-βRⅡ/ERK1/2/SNAI2/Bcl-2环路增强Luminal-A型乳腺癌细胞T-47D的抗失巢凋亡潜能，促进循环系统中的T-47D肿瘤细胞抵抗凋亡外渗进入肺组织。
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