【摘 要】
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该研究自行设计和运用一种新的基因克隆技术——定向跳跃克隆PCR,以PKD1区的质子泵基因AJ1为起点,克隆了一个预期位于NK92.6 SH1.0近侧Mu1I位点处的DNA片段.经与反向PCR结果
【出 处】
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华西医科大学 四川大学华西医学中心 四川大学
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该研究自行设计和运用一种新的基因克隆技术——定向跳跃克隆PCR,以PKD1区的质子泵基因AJ1为起点,克隆了一个预期位于NK92.6 SH1.0近侧Mu1I位点处的DNA片段.经与反向PCR结果比较,并通过缺失杂交定位和对克隆片段的酶谱分析证实,该片段极可能位于NK92.6 SH1.0的近侧.此外,对该片段进行了部分的序列分析,并将获得的DNA序列在Gene Bank Debase (1992年版本6.6)中搜寻,结果在灵长类、啮齿类以及其它的哺乳动物基因库中未发现有80%以上同源的DNA序列录入,可能是一个新的测序片段.因此,该片段除可用作筛选PKD1候选基因的探针外,其基因组位点还可作为染色体跳跃克隆新的起点和单拷贝序列标记位点(sequence tagged site,STS),从而为PKD1基因本身以及位于该区内其它基因的定位克隆奠定了基础.该文结果还表明,定向跳跃克隆PCR同时具备了经典的染色体跳跃技术能快速接近靶基因以及PCR技术简单、快速、经济的优点,预计在基因或DNA片段的定位克隆中有较大的推广应用价值.该方法在国内外未见文献报道.
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