家蚕BmACCi蛋白的抗体制备和定位分析

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wycgdxx86
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在本实验室的家蚕蛹cDNA文库中,发现一个编码家蚕未知蛋白的EST序列。以该序列为信息探针,从SilkBase数据库中搜索到一条cDNA序列。该cDNA序列含有编码家蚕该未知蛋白的完整的ORF并经序列比对,该ORF序列所编码的蛋白与相近物种如冈比亚按蚊(ENSANGP00000010532),埃及伊蚊(conservedhypothetica.protein),果蝇(CG10473-PA,isofor.A)有较高同源性,皆在55%左右;与家犬和小鼠的apoptoti.chromati.condensatio.inducer蛋白同源性也在55%左右,为研究方便,故将其命名为BmACCi(Bomby.mor.apoptoti.chromatincondensatio.inducer-lik.protein),基因登陆号为FJ602776。该ORF序列长为627bp,其编码的蛋白质BmACCi为208个氨基酸,该蛋白质预测的等电点以及分子量分别为9.37和24.4.kDa,属于碱性蛋白质。   我们将扩增到的BmACCi基因插入到融合表达载体pET-28a相应的酶切位点上,得到融合蛋白表达质粒pET-28a-BmACCi,经PCR,酶切鉴定以及测序证明重组子是正确的。将该重组子转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为.mM的IPTG诱导重组菌后,裂解菌体作SDS-PAGE分析,在2.kDa左右的位置有一条特异性蛋白条带,与预期值(融合标签3.5.kDa,BmACC.24.4.kDa)相符。融合蛋白以可溶性形式存在,故用超声裂解菌体后1200.rpm离心所得的上清以亲和层析的方法纯化目的蛋白His-ta.BmACCi。以纯化所得蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔,制备了该重组蛋白的多克隆抗体,ELISA检测该抗血清的效价可达到1:8000以上。提取家蚕五龄幼虫的各组织蛋白,用于Wester.blotting实验。实验结果表明,BmACCi蛋白在家蚕的头、丝腺、气管、卵巢、睾丸、脂肪体等组织中都有表达,且在头部和气管中表达量最高,而在表皮、中肠、马氏管等组织中我们尚未检测到该蛋白的存在。亚细胞定位结果表明,该蛋白主要存在细胞核中,少量存在于细胞质中。
其他文献
  利用卫星遥感监测到的2009-2011年期间巢湖蓝藻暴发实况,结合统计发生日的湖区周边合肥、巢湖两气象站的气象观测资料,进行巢湖蓝藻暴发气象因子分析。结果表明,合适的地表
利用FY-2E静止气象卫星云图结合FY-3极轨气象卫星、天气雷达和常规天气资料对2012年6月9日发生在黑龙江省中部地区的雹暴云团进行分析,该雹暴云团所经之处出现了大冰雹和下击
  大气CO2浓度的增加导致气候变暖已成为共识。然而如何能够连续获得CO2的全球时空分布和变化特性并进一步了解全球碳循环及其源和汇的空间分布,仍然是科学工作努力探索的
会议
孤雌胚胎干细胞是一种新的治疗性克隆胚胎干细胞,与体细胞克隆胚胎干细胞相比具有与其来源动物完全相同的组织相容性抗原,可以用以组织细胞的替代疗法,在人医学上应用前景广阔,意
土石坝的本构模型参数是计算其变形和稳定的前提。大多数工程的本构模型参数都是通过试验得到的,但是由于试验环境、操作方法与试验试件等因素的影响,得到的参数与实际参数有较
本文以武汉市为研究区域,选用EOS/MODIS卫星数据,反演武汉市城镇用地地表温度和植被覆盖度;并分析它们之间的空间变化特征,以及植被对武汉市热岛效应的影响.结果表明:武汉市
植被建设是根治我国水土流失和改善生态环境质量的重大政策措施,开展植被建设(变化)的水文生态效应研究对正确评价植被建设的水文生态效益具有重要的现实意义。   本文以头塘
学位
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊