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在本实验室的家蚕蛹cDNA文库中,发现一个编码家蚕未知蛋白的EST序列。以该序列为信息探针,从SilkBase数据库中搜索到一条cDNA序列。该cDNA序列含有编码家蚕该未知蛋白的完整的ORF并经序列比对,该ORF序列所编码的蛋白与相近物种如冈比亚按蚊(ENSANGP00000010532),埃及伊蚊(conservedhypothetica.protein),果蝇(CG10473-PA,isofor.A)有较高同源性,皆在55%左右;与家犬和小鼠的apoptoti.chromati.condensatio.inducer蛋白同源性也在55%左右,为研究方便,故将其命名为BmACCi(Bomby.mor.apoptoti.chromatincondensatio.inducer-lik.protein),基因登陆号为FJ602776。该ORF序列长为627bp,其编码的蛋白质BmACCi为208个氨基酸,该蛋白质预测的等电点以及分子量分别为9.37和24.4.kDa,属于碱性蛋白质。
我们将扩增到的BmACCi基因插入到融合表达载体pET-28a相应的酶切位点上,得到融合蛋白表达质粒pET-28a-BmACCi,经PCR,酶切鉴定以及测序证明重组子是正确的。将该重组子转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为.mM的IPTG诱导重组菌后,裂解菌体作SDS-PAGE分析,在2.kDa左右的位置有一条特异性蛋白条带,与预期值(融合标签3.5.kDa,BmACC.24.4.kDa)相符。融合蛋白以可溶性形式存在,故用超声裂解菌体后1200.rpm离心所得的上清以亲和层析的方法纯化目的蛋白His-ta.BmACCi。以纯化所得蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔,制备了该重组蛋白的多克隆抗体,ELISA检测该抗血清的效价可达到1:8000以上。提取家蚕五龄幼虫的各组织蛋白,用于Wester.blotting实验。实验结果表明,BmACCi蛋白在家蚕的头、丝腺、气管、卵巢、睾丸、脂肪体等组织中都有表达,且在头部和气管中表达量最高,而在表皮、中肠、马氏管等组织中我们尚未检测到该蛋白的存在。亚细胞定位结果表明,该蛋白主要存在细胞核中,少量存在于细胞质中。