基于UPLC-MS技术的针刺合募配穴治疗功能性消化不良的代谢组学研究

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目的采用基于超高效液相色谱串联四级杆轨道阱质谱(UPLC-Q- Exactive Orbitrap-MS)的技术和方法研究针刺合募配穴对功能性消化不良(Functional Dyspepsia, FD)患者血浆中内源性小分子(分子量<1000)代谢物的影响,探讨针刺合募配穴对效应物质基础含量变化的影响及其规律,为揭示针刺合募配穴治疗FD的代谢组学机制提供新的生物信息学依据和线索。方法1.FD患者的血浆代谢组学研究:采用UPLC-Q- Exactive Orbitrap-MS代谢组学技术,通过与健康组比较,找出FD的血浆潜在生物标志物,利用MetPA平台分析潜在生物标志物的代谢途径。2.合募配穴治疗FD的代谢组学研究:分别采用针刺合募配穴、下合穴、募穴治疗FD,运用UPLC-Q- Exactive Orbitrap-MS代谢组学技术,通过与各组治疗前比较,找出各组FD患者在针刺治疗2个疗程(10天)、4个疗程(20天)后血浆中差异具有统计学意义的生物标志物。3.各组血浆中差异标志物的含量变化分析:以健康组的血浆标志物的均值含量为参考标准,对针刺合募配穴、下合穴、募穴治疗FD的治疗前、治疗2个疗程、治疗4个疗程后血浆中的差异标志物的均值含量做整体比较,观察各标志物在各组中的均值含量变化趋势及变化规律,探讨针刺合募配穴对FD患者血浆代谢物的影响。结果1.与健康组相比,FD患者血浆中苯乙胺、(3R,7R)-1,3,7-Octanetriol含量明显下降(P<0.01);亚硝酸盐、2-苯乙酰胺、L-别异亮氨酸含量明显升高(P<0.01);2-己基甘油、4-羟基-L-谷氨酸含量明显下降(P<0.05);1-二氢吡咯—2—羧酸酸、D-脯氨酸含量明显升高(P<0.05),是FD的潜在生物标志物。与FD疾病相关的代谢通路是苯丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢。2.从针刺合募配穴(足三里、中脘)治疗FD患者2个疗程和4个疗程后的血浆中,共筛选出15个具有统计学差异的标志物(P<0.05),并成功鉴定10个,其中亚硝酸盐、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸、L-别异亮氨酸在针刺合募配穴治疗后的血浆中均呈下调趋势;2-己基甘油、氨基丙二酸、1-吡咯啉-2-羧酸、4-羟基-L-谷氨酸、3-甲基组氨酸、12酮脱氧胆酸在针刺合募配穴治疗后的血浆中均呈上调趋势。针刺合募配穴治疗FD的相关调节通路是苯丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢。3.从针刺下合穴(足三里)治疗FD患者2个疗程和4个疗程后的血浆中,共筛选出11个具有统计学差异的生物标志物(P<0.05),并成功鉴定9个,其中亚硝酸盐、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸、(3R,7R)-1,3,7-Octanetriol.L-异亮氨酸在针刺足三里穴治疗后的血浆中均呈下调趋势;2-己基甘油、4-羟基-L-谷氨酸、12酮脱氧胆酸、烟酰胺在针刺足三里穴治疗后的血浆中均呈上调趋势。针刺下合穴治疗FD的相关调节通路是苯丙氨酸代谢。4.从针刺募穴(中脘)治疗FD患者2个疗程和4个疗程后的血浆中,共筛选出11个具有统计学差异的标志物(P<0.05),并成功鉴定10个,其中亚硝酸盐、2-苯乙酰胺、D-脯氨酸在针刺中脘穴治疗后的血浆中均呈下调趋势;2-己基甘油、氨基丙二酸、1-吡咯啉-2-羧酸、4-羟基-L-谷氨酸、3-甲基组氨酸、12酮脱氧胆酸、L-别苏氨酸在针刺中脘穴治疗后的血浆中均呈上调趋势。针刺募穴治疗FD的相关调节通路是苯丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢。结论1.一系列代谢物的含量变化异常是FD患者血浆代谢物的共同特点,其中,血浆苯乙胺、亚硝酸盐、2-苯乙酰胺、2-己基甘油、4-羟基-L-谷氨酸、1-吡咯啉-2-羧酸、D-脯氨酸、(3R,7R)-1,3,7-Octanetriol.L-别异亮氨酸,是FD潜在的生物标志物。2.与FD疾病相关的潜在靶标通路可能是苯丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢。3.针刺合募配穴治疗FD的代谢组学机制可能与调控苯丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢有关。4.针刺合募配穴、下合穴、募穴对FD疾病相关代谢标志物都有一定的良性调节作用,合募配穴的总体调节作用优于下合穴和募穴。
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