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同源异型蛋白Proxl(prospero-related homeobox)是果蝇Prospero蛋白在脊椎动物中的同源物。Proxl基因敲除小鼠在胚胎期死亡,说明proxl在早期器官形成和胚胎发育分化中扮演重要的角色。目前,对Proxl功能的研究主要集中于阐明Proxl在淋巴管形成中的核心地位,少量涉及Proxl在眼发育中的调控作用,而对Proxl其它的生物学功能了解不多,在本文中,初步研究了Proxl在免疫细胞中的作用。
第一章Proxl抑制干扰素Gamma(IFN-γ)的表达。
首先用RT-PCR、Western Blot的方法在Jurkat T细胞和人原代CD4+T细胞中检测到了Proxl的表达,并且发现在T细胞活化过程中Proxl表达下降。在Jurkat T细胞中过表达Proxl抑制了内源IFN-γ的表达。报告基因分析结果显示Proxl通过抑制IFN-γ基因启动子活性而在转录水平上抑制IFN-γ的表达。染色质免疫沉淀(ChIP)的结果显示Proxl结合在IFN-γ启动子上。过氧化物酶体增殖物激活受体Gamma(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)是已知的IFN-γ的抑制因子之一。CoIP和GST Pull Down的实验结果显示Proxl与PPARγ存在直接的相互作用。进一步的实验则表明上述相互作用与Proxl对IFN-δ启动子活性的抑制相关。此外,PPARγ的拮抗剂可削弱Proxl与IFN-γ启动子的结合。
综合上述结果,推测Proxl在T细胞内通过PPARγ的相互作用抑制IFN-γ基因的表达。
第二章Proxl抑制白介素2(IL-2)的表达。
除IFN-γ外,还发现在T细胞活化过程中,过表达Proxl也有效地抑制IL-2的表达。报告基因分析结果显示Proxl显著地抑制IL-2启动子的转录活性。NFAT是激活IL-2表达的重要转录因子之一,当IL-2启动子上部分NFAT位点突变后,Prox1对IL-2启动子活性的抑制程度减弱。进一步的研究结果表明Prox1与NFAT2存在直接的相互作用,该相互作用能抑制NFAT2的转录激活活性。
根据上述结果,推测Prox1可能通过与NFAT2的相互作用抑制IL-2的表达。