耐热酸性淀粉酶筛选及酶学特性研究

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α-淀粉酶是一种重要的工业用酶,广泛应用于淀粉糖生产、发酵、纺织、造纸等行业中。由于工业上需要α-淀粉酶能在高温和酸性环境下水解淀粉,耐热酸性α-淀粉酶成了当前的研究热点之一。研究和开发耐高温酸性淀粉酶具有重要的经济价值和学术意义。本研究对杭州、山东、天津、陕西和云南等地各种土壤样品进行了大量筛选实验,从杭州双峰茶园的土样中筛选到一株耐高温酸性淀粉酶高产菌株,经16s rDNA鉴定为芽孢杆菌(Bacillales bacterium.),命名为Bacillales bacterium.SF-8。对该菌株产生耐高温酸性淀粉酶的各种影响因子进行了研究,通过对发酵培养基和培养条件的优化,发酵液中淀粉酶活性最高达到6440 U/mL(60℃,pH 5.0),比初始培养基提高了10倍。对该菌株产生的耐高温酸性淀粉酶酶学特性研究发现,该酶的最适pH为5.0,最适温度为60℃,在60℃环境下处理100 min后仍有66%酶活性,4℃环境中放置10天后仍有57%的活性。酶的热稳定性和活性对Ca2+没有依赖性,Fe2+,Mg2+,Mn2+等常见金属离子对酶活性没有明显的抑制作用。酶活性染色揭示该酶的分子量约为60 kD。薄层分析后发现其水解产物主要为麦芽糖和糊精。SF-8菌株产酸性α-淀粉酶活性高并且耐热性好,具有良好的工业应用前景。
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