【摘 要】
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重瓣大岩桐和大花蕙兰均为近年来流行的观赏类花卉，有极高的商业价值。重瓣大岩桐由于雌雄蕊退化而丧失了结实能力，用种子繁殖受到一定程度的限制。大花蕙兰的栽培周期较长，且常
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重瓣大岩桐和大花蕙兰均为近年来流行的观赏类花卉，有极高的商业价值。重瓣大岩桐由于雌雄蕊退化而丧失了结实能力，用种子繁殖受到一定程度的限制。大花蕙兰的栽培周期较长，且常规繁殖以分株为主，繁殖率低，难以满足规模化生产的需要。本实验探索通过组织培养加快重瓣大岩桐和大花蕙兰的繁殖速度及提高繁殖系数，以解决市场供不应求的问题，也为其工厂化生产提供技术依据。另外，大花蕙兰的生育期长，一般要3年以上才能开花，在有些地区如广东甚至不易开花，大大降低了其商品价值，因此迫切需要一种全新的手段来解决这一问题。本研究利用农杆菌介导法及基因枪直接导入法将从拟南芥中分离出来的细胞周期蛋白基因CycD2导入大花蕙兰的三个品种LR515，LA516及KY827，以期获得能提早开花的大花蕙兰。取得的主要研究结果如下： 1．重瓣大岩桐组培再生体系的建立：以叶片为外植体，采取2％NaClO 15min+1％升汞20min灭菌方案，MS+BA1.0mg／L+NAA0.2mg／L为愈伤组织诱导与增殖培养基，MS+BA3.0mg／L+NAA0.2mg／L为绿苗分化培养基，1／2MS+NAA0.2mg／L为生根培养基，建立了重瓣大岩桐的组织培养再生体系。 2．大花蕙兰转基因受体系统的建立：以茎尖为外植体，MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.5mg／L为PLB(圆球茎)诱导与增殖培养基，1／2MS+NAA0.2mg／L为分化培养基，硝酸镧和椰子粉作为添加物，并采取液体旋转预培养建立了大花蕙兰的转基因受体系统。 3．在转基因细胞筛选中，LR515，LA516，KY827分别需60，60，70mg／L的潮霉素作为最高筛选浓度，抗生素采用先低后高的原则。 4．大花蕙兰对农杆菌的敏感性差，转化效率低，但脱菌处理比较容易。 5．在基因枪转化中，大花蕙兰圆球茎不能使用较为剧烈的高渗处理条件；短射程和2次轰击会降低LR515的抗性圆球茎率，但对KY827几乎没有影响。 6．获得大花蕙兰抗性小苗。
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