【摘 要】
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为建立原位PCR方法检测慢粒BCR-ABLmRNA,探讨in situ RT-PCR检测细胞涂片的可行性及主要操作的最佳条件.主要内容有:应用改良的"一步法RNA提取"法提取慢粒外周血标本RNA;以
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为建立原位PCR方法检测慢粒BCR-ABLmRNA,探讨in situ RT-PCR检测细胞涂片的可行性及主要操作的最佳条件.主要内容有:应用改良的"一步法RNA提取"法提取慢粒外周血标本RNA;以K<,562>细胞为阳性对照,ficoll分离出慢粒外周血单个核细胞,应用in situ RT-PCR检测bcr-ablmRNA.结果证实,in situ RT-PCR能敏感、特异地检测细胞内bcr-ablmRNA;In situ RT-PCR的主要操作步骤包括样本的制备,样本的预处理,原位反转录,原位扩增及原位检测;原位PCR有直接法和间接法两种,直接法较间接法更易产生非特异性结果导致假阳性.该实验研究,严格的对照和仔细的操作能避免这个缺陷且直接法较间接法更简单、更省时、更少费用.
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