蓝藻Na<'+>/H<'+> Antiporter基因的遗传转化研究

• 作 者: 王姝杰
• 机 构: 南京师范大学
• 出 处: 南京师范大学
• 发表日期: 2005年期
• 关键词: 蓝藻 耐盐基因 耐盐性 保护酶系统 基因转化 遗传转化 烟草 番茄 苜蓿

由高盐浓度引起的离子平衡紊乱和渗透胁迫是影响植物生长发育和造成作物减产的主要环境因子。
SynNhap基因是从蓝藻(Synechocystispcc6803)中克隆得到的，编码质膜Na+/H+逆向转运蛋白，全长1581bp(不包括终止密码子)，编码527个氨基酸，该基因在发挥耐盐性方面有重要作用。本研究利用农杆菌介导的植物遗传转化方法，将SynNhap基因转到番茄和苜蓿中，同时检测了转SynNhap基因烟草F1代的耐盐性及几种保护酶的活性。其主要研究结果如下：
(1)F1代转基因烟草耐盐性的检测。通过对不同NaCl浓度下的发芽率、生存率、叶绿素含量、Na+含量及耐盐性表现的检测，结果表明：转基因烟草的发芽率、生存率、叶绿素含量均较对照高，Na+含量较对照有所下降，并且转基因烟草在200mMNaCl处理下，仍能正常存活生长，而对照烟草的生长却受到抑制。
(2)F1代转基因烟草的过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、细胞膜通透性的检测。随着NaCl浓度的逐渐增加，转基因烟草和对照的SOD、POD和CAT活性均呈现先升后降的变化趋势，但总体来说，转基因烟草三者的活性比对照要高；MDA含量和质膜通透性则呈增加趋势，但转基因烟草增加的幅度比对照要低些。由此推测：转SynNhap基因烟草耐盐性的提高可能与保护酶活性的提高有关。
(3)番茄的遗传转化。利用农杆菌介导的叶盘法，选取子叶为外植体，获得转SynNhap基因番茄的再生植株，经过PCR检测，发现该基因已经整合到番茄的染色体上。
(4)苜蓿的遗传转化。利用农杆菌介导的叶盘法，选取子叶为外植体，现已获得大量的抗性愈伤组织，并且在愈伤组织上有绿色的突起(似分化状)，尚未得到分化完全的再生植株。