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研究背景近年来，非酒精性脂肪肝病（NAFLD）患病率在发展中国家及发达国家都有明显的上升趋势，已成为影响人类健康的第二大肝病。在西方国家，其发病率达20%-40%,在我国普通人群患病率约为15%。NAFLD被认为是代谢综合征在肝脏中的表现，但发病机制未明,目前较为被公认的是“二次打击学说”。随着全基因组学的不断发展，许多国内外研究发现，PNPLA3基因多态性(如rs738409、rs6006460、rs2294918、rs2281135)与其密切相关，有学者发现PNPLA3基因敲除的老鼠肝脏组织并无脂质积聚。Naokikumashiro等人用specific antisenseoligonucleotides(SAO)作用于高脂饮食的大鼠来降低PNPLA3mRNA的表达，发现降低其表达可以减轻防止肝脏脂肪变性，因此推测PNPLA3脂肪合成活性可能占其主导地位。随着对表观遗传学研究不断深入，DNA甲基化在NAFLD中的作用越来越受到人们的重视，尤其是脂质、糖类代谢的关键脂肪因子、限速酶等。目前研究发现PNPLA3rs738409基因多态性与NAFLD密切相关，但在正常肝细胞及脂肪肝细胞中PNPLA3mRNA的表达方面并无相关报道,在脂肪肝细胞中，PNPLA3mRNA是否高表达从而使其脂肪合成活性更加占主导地位而引起脂肪肝？且PNPLA3启动子区甲基化状态是否与非酒精性脂肪性肝病发病有关？本研究以体外人肝L02细胞为研究对象，用油酸诱导建立脂肪肝细胞模型，以荧光定量PCR的方法来检测PNPLA3mRNA的表达情况，并用焦磷酸测序的方法对其CpG岛甲基化状态进行分析，探讨PNPLA3在NAFLD中的作用,为NAFLD的防止提供新的理论依据。目的探讨PNPLA3在非酒精性脂肪肝病中的表达水平及其CpG岛甲基化状态，探讨PNPLA3在NAFLD发生、发展中的作用。方法：1.采用10ug/ml的油酸作用于人正常肝细胞株L02建立脂肪肝细胞模型，72h后经油红O染色，观察正常组、脂肪肝模型组及给药组细胞内脂滴形成情况，并用荧光定量PCR检测PNPLA3在三组肝细胞中的表达情况。2.采用专用DNA提取试剂盒分别提取正常组、脂肪肝模型组、给药组细胞中DNA，经亚硫酸转化后行PCR扩增目的基因，并用焦磷酸测序方法检测不同组PNPLA3CpG岛中甲基化水平，探讨其在非酒精性脂肪性肝病中的作用。结果：1、脂肪肝模型组肝细胞PNPLA3mRNA的表达高于正常组，经姜黄素给药后，其表达降低，差异均有统计学意义（p<0.05）。2、在PNPLA3启动子区6个检测位点中，脂肪肝组位点2甲基化水平低于正常组，姜黄素给药后甲基化水平升高，差异均有统计学意义（p<0.05），在其余各检测位点中甲基化水平无差异。结论：1、油红O染色染色后，脂肪肝模型组细胞内发现有大量红色脂滴积聚，而正常组基本上未见脂滴，姜黄素给药组脂滴较模型组减少，表明用10ug/ml的油酸诱导能成功建立体外肝细胞模型。2、PNPLA3mRNA的表达水平及其启动子区甲基化状态与非酒精性脂肪肝发病有关，并起着非常重要的作用。3、抑制PNPLA3d的活性和降低肝脏PNPLA3mRNA的表达今后可能是治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的一个新的治疗方法。