【摘 要】
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【目的】自噬是细胞死亡的重要方式,白藜芦醇可通过促进肿瘤细胞自噬性死亡,并促进喉癌细胞株Hep-2凋亡,但白藜芦醇是否通过诱导Hep-2细胞自噬而死亡,以及其在促自噬与促凋亡
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【目的】自噬是细胞死亡的重要方式,白藜芦醇可通过促进肿瘤细胞自噬性死亡,并促进喉癌细胞株Hep-2凋亡,但白藜芦醇是否通过诱导Hep-2细胞自噬而死亡,以及其在促自噬与促凋亡之间的关系并不清楚,本研究拟验证白藜芦醇促Hep-2细胞自噬的作用,以及其促自噬与促凋亡之间的关系,为白藜芦醇的抗肿瘤作用提供新的实验依据。【方法】MTT法测定细胞存活,q RT-PCR和western blot分别分析m RNA和蛋白水平,MDC染色和透射电镜分别检测自噬小体和自噬泡,DCFH-DA染色法分析细胞内活性氧水平,Hoechest33258染色检测凋亡细胞,用SPSS 13.0软件进行实验数据分析并作图。【结果】白藜芦醇剂量和时间依赖性地减少Hep-2细胞的存活率,以80μM作用的效果作为显著,白藜芦醇剂量和时间依赖性地促进Hep-2细胞自噬,以40μM和第6h时最为显著,其增加LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的比率,促进beclin-1蛋白和m RNA的表达,细胞内的自噬泡和自噬小体数量也显著增加,机制研究发现,白藜芦醇促Hep-2细胞自噬作用与其促活性氧增多有关,经白藜芦醇处理后,Hep-2细胞内活性氧增加约6倍,进一步研究发现,活性氧通过激活AMPK-m TOR途径而促进Hep-2细胞自噬的。用3MA和CQ抑制自噬则白藜芦醇对Hep-2细胞的促凋亡作用显著减弱。【结论】白藜芦醇能诱导Hep-2自噬,其浓度和时间依赖性上调LC3和beclin1表达;白藜芦醇促进Hep-2 ROS生成,白藜芦醇通过ROS介导AMPK-m TOR通路诱导Hep-2自噬;抑制自噬减低白藜芦醇对Hep-2细胞凋亡的诱导作用。
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