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目的:探讨自体角朊细胞在自体皮岛抑制效应中的作用及其机制。方法:1.分离外周血淋巴细胞和表皮细胞,建立MELR试验体系,通过引入附加的自体表皮细胞(并以等量的异体表皮细胞为对照),在体外模拟自体皮岛效应。2.分析加入和不加入自体角朊细胞的MELR体系中,IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10等几种细胞因子分泌的动力学曲线。根据以上动力学曲线,在加入和不加入自体角朊细胞的MELR体系中,引入相应的中和性抗体,观察反应格局的变化。3.通过IL-10基因敲除小鼠实验,来观察IL-10在诱导免疫抑制中T细胞和角朊细胞各自的重要作用。4.对角朊细胞进行B7-1的转染,以及负性调节分子CTLA-4的阻断实验,分析这些经典的共刺激分子与角朊细胞诱导抑制的关系。5.观察MELR体系中角朊细胞B7-H1的表达情况,并通过B7-H1单抗的阻断实验,来探讨这一新发现的B7分子在自体皮岛抑制效应中的作用。结果:1.在La+Eb+Kcb的实验组中,8小时开始出现IL-2,并逐渐增高,16小时开始有IFN-γ的出现,也逐渐增高。但始终没有检测到IL-4和IL-10的存在。在La+Eb+Kca的实验组中,起初的一段时间里,也出现了较低浓度的IL-2和IFN-γ,到了32小时后开始下降并消失。以此同时开始出现IL-10和IL-4,并开始持续增高,特别是IL-10在48小时升高尤为明显。单独加入抗IL-10时,在32小时以前,可明显缓解抑制,这可能与系统早期只出现IL-10有关。而在32小时以后或单独加入抗IL-4时,都没有很大的缓解作用。2.在同种异体增殖抑制作用中起主要作用的是淋巴细胞来源的IL-10而并非角朊细胞分泌的IL-10,但后者有部分协同作用。3.自体角朊细胞在转染B7-1基因后,对同种异体增殖反应的抑制诱导能力消失,但加入抗B7-1单抗阻断B7-1的作用后,其诱导抑制的能力又恢复。而CTLA-4在自体角朊细胞诱导的抑制中并不发挥相关作用。4. B7-H1在MELR的体系中4小时开始有微弱的表达,而8小时之后,就有较强的表达;加入B7-H1单抗或PD-1单抗来阻断实验后,自体角朊细胞的抑制作用缓解或消失。结论:1.自体角朊细胞是通过激活T细胞分泌IL-10激活Th2亚群而抑制Th1亚群来诱发局部免疫抑制。2.自体角朊细胞通过B7-1、B7-2以外的其他分子提供共刺激信号,而且其负向调节作用与CTLA-4无关。3.自体角朊细胞是通过B7-H1提供共刺激信号,进而激活分泌IL-10的Th2细胞,最终遏制Th1功能诱导局部免疫抑制的。