论文部分内容阅读
目的通过病例-对照研究，阐明载脂蛋白M（Apolipoprotein M，apoM）在冠心病发展中的作用及其与相关脂蛋白的关联性；通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）病例筛查冠心病病人与对照组apoM启动子区域多态性，揭示其与冠心病发病的关联；通过对比分析野生型和突变型apoM启动子-荧光素酶报告基因表达变化，揭示启动子区域多态性对于apoM表达的影响。从而阐明apoM启动子突变在冠心病发病及相关因素中的作用。方法筛选88例经冠脉造影确诊的冠心病患者和88例健康对照，利用ELISA技术检测血清apoM及相关血脂水平。同时，将病例组分为SAP组和ACS组并根据CAD患者冠脉狭窄程度对两组患者进行Gensini积分；PCR-RFLP技术筛查apoM近端启动子rs805296、rs9404941单核苷酸多态性进行基因分型，计算等位基因在病例组与对照组中的频率，并进行Hardy-weinberg平衡吻合度检测，以确定选取的单核苷酸多态性（Single NucleotidePolymorphism，SNP）位点在病例组与对照组中的遗传平衡状态；构建包含apoM基因启动子野生型、rs805296位点突变型、rs9404941位点突变型和双突变型的荧光素酶报告基因表达载体，瞬时转染HepG2细胞，检测荧光素酶表达活性。结果冠心病患者血清apoM为9.58±4.30μg/ml，而正常人为12.22±6.59(P<0.05)。apoM与血清HDL-C水平呈正相关(r=0.752， P=0.000)，而与TG、LDL-C及FPG呈负相关，分别为(r=-0.222，P=0.038)，(r=-0.533，P=0.00)，(r=-0.628，P=0.000)，多元回归线性分析表明与HDL-C关系最为密切。rs805296（SNPT-778C）、rs9404941（T-855C）与冠心病的发生及病情的严重程度相关。冠心病病人中SNPT-778C CT/CC基因型为27.63%而对照组为10.52%（P<0.05），C等位基因频率明显高于对照组（14.20比5.11%P<0.05，OR=3.290，95%CI1.487-7.280）TT基因型Gensini经自然对数转换后积分显著低于TC/CC基因型（3.38±1.18VS4.20±0.67，P=0.001，OR=1.00695%CI=0.998-1.014）。而SNPT-855C CT/CC基因型为9.09%而对照组为3.85%（P<0.05），C等位基因频率明显高于对照组（17.05%比5.68%P<0.05，OR=3.206，95%1.139-2.204）。TT基因型Gensini经自然对数转换后，积分显著低于TC/CC基因型（3.32±1.08VS4.17±1.16，P=0.002，OR=1.015，95%CI=1.006-1.025）。成功构建四种包含不同apoM基因启动子单体型的荧光素酶报告基因表达载体。在转染HepG2细胞后，荧光素酶相对活性检测结果提示rs805296、rs9404941所组成的CC活性显著低于TT/TC/CT，CT较TC启动子活性下降更加显著。结论血清apoM水平可作为判断CHD的生物指标之一。apoM基因rs805296、rs9404941在皖北地区汉族人中与冠心病发病相关，且与CAD严重程度相关。rs805296、rs9404941等位基因C可以显著下调apoM基因转录活性。