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目的:通过构建动物模型,研究过表达miR-125a-5p对人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤TKI耐药的影响,并在体内水平探讨miR-125a-5p参与人肺腺癌细胞厄洛替尼获得性耐药可能的分子机制。方法:1、Erlotinib获得性耐药细胞PC9/ER的培养及其耐药性检测:培养PC9及PC9/ER细胞,用CCK-8检测Erlotinib对PC9、PC9/ER细胞的增殖抑制率并计算耐药指数。2、miR-125a-5p慢病毒载体感染PC9/ER细胞及检测miR-125a-5p差异性表达:用慢病毒感染技术感染PC9/ER细胞,Real-time RT-PCR检测肿瘤细胞中miR-125a-5p表达变化。3、Erlotinib对PC9、PC9/ER及miR-125a-5p慢病毒转染的PC9/ER细胞裸鼠移植瘤生长的影响:建立裸鼠移植瘤模型,用生理盐水及Erlotinib灌胃治疗,每2天称量裸鼠体重及测量瘤体的长短径,观察裸鼠生长状态及Erlotinib抗肿瘤情况。灌胃治疗2周后处死裸鼠并剥离瘤体。4、miR-125a-5p过表达及Erlotinib作用抑制PC9/ER细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制:用Real-time RT-PCR和Western blot技术检测肿瘤组织中miR-125a-5p、EGFR、Rab25、PARP、Caspase 3、PI3K/AKT通路的mRNA及相关蛋白表达。用免疫组化检测肿瘤组织中Rab25蛋白表达。结果:1、显微镜下观察PC9细胞形态呈短梭形或多边形,而Erlotinib维持培养的PC9/ER细胞形态呈长梭形。Erlotinib作用48h后PC9、PC9/ER细胞的IC50分别为:(0.16±0.06)μmol/L、(6.14±0.27)μmol/L,PC9/ER细胞对Erlotinib的耐药指数为38.37倍。2、慢病毒载体感染PC9/ER细胞的感染效率达90%以上,检测发现miR-125a-5p在PC9/ER-miR-125a-5p细胞中稳定高表达,比PC9、PC9/ER和PC9/ER-Vector细胞显著增高(P<0.05)。3、裸鼠成瘤率为100%,灌胃治疗后Erlotinib组的肿瘤生长速度均比生理盐水组减慢。剥离PC9、PC9/ER、PC9/ER-Vector、PC9/ER-mi R-125a-5p生理盐水组与Erlotinib组的裸鼠肿瘤体积分别为(581.24±48.07)、(111.95±54.30)、(1099.98±37.92)、(450.63±65.75)、(1064.55±81.09)、(486.21±29.01)、(848.21±50.08)、(345.90±69.60)mm~3,Erlotinib组与生理盐水组相比,Erlotinib组的肿瘤体积均明显减小,其中PC9组肿瘤体积最小(P<0.05),而PC9/ER-miR-125a-5p组肿瘤体积比PC9/ER和PC9/ER-Vector组小(P<0.05)。生理盐水组和Erlotinib组的移植瘤均为肿瘤组织。4、在裸鼠肿瘤组织中,过表达miR-125a-5p能降低Rab25、PI3K、AKT m RNA表达水平,并且能使Rab25及p-AKT蛋白表达减少,而Erlotinib给药后p-AKT水平降低更明显(P<0.05)。同时,过表达miR-125a-5p能使凋亡相关蛋白Active Caspase3表达增加、Cleaved PARP蛋白表达无变化,而Erlotinib给药后Active Caspase3表达减少、Cleaved PARP蛋白表达增加(P<0.05)。但是,miR-125a-5p过表达后对EGFR、PARP、Caspase 3 mRNA及蛋白水平无明显影响(P>0.05)。结论:1、过表达miR-125a-5p能在一定程度上增强PC9/ER细胞裸鼠移植瘤对厄洛替尼的敏感性。2、mi R-125a-5p可能通过影响Rab25/PI3K/AKT信号通路及相关凋亡蛋白表达参与NSCLC厄洛替尼获得性耐药。