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目的:研究黄芩各有效组分对肝硬化腹水模型的治疗作用及作用机制。探讨黄芩治疗肝硬化腹水的作用机制,为研究黄芩各有效组分治疗肝硬化腹水提供实验依据。方法:1.黄芩各有效组分对肝硬化腹水大鼠模型的治疗利用苯巴比妥、乙醇联合四氯化碳制备大鼠肝硬化腹水模型,观察给药后大鼠症状与体征(腹围、24h尿量)的变化,并通过相关药效学评价,包括肝功(ALT、AST)、血清总胆红素(TBIL)、肾功(Cr、BUN)、血清纤维化(HA、LN、PCⅢ和CⅣ)及肝组织病理学观察,评价肝硬化腹水模型是肝肾功能损伤,明确黄芩对肝腹水及肝损伤的改善作用。2.黄芩各有效组分对肝硬化腹水大鼠模型的作用机制研究(1)利用ELISA等生化分析方法,通过分析黄芩对肝腹水模型大鼠的血清离子(Na+、K+、Cl-)、血浆胶体渗透压及血清蛋白(COP、ALB、TP)、血浆肾素-血管紧张素系统(RAAS)AngⅡ和SRA、抗利尿激素(AVP)、内皮素1(ET-1)的改善作用,系统研究和评价黄芩治疗肝硬化腹水的作用机制。(2)利用Western blot及RT-PCR等分子生物学手段,研究黄芩对肝腹水模型大鼠肾组织水通道蛋白2(AQP2)、AVP受体(V2R)的蛋白及基因表达情况,观察黄芩对肾水通道蛋白及AVP受体表达的影响;同时,对胆总管中水通道蛋白4(AQP4)蛋白及基因表达进行测定,探讨黄芩对胆汁排泄的影响,从水通道蛋白的角度探讨黄芩治疗肝硬化腹水作用的分子机制。结果:1.黄芩对肝腹水模型大鼠的治疗作用实验结果显示,黄芩各有效组分对肝腹水模型大鼠的症状和体征具有明显的改善作用,给药后动物的腹围降低,尿量明显增加;对肝功能、肾功能的测定结果显示,与模型组比较,给药组ALT、AST、T-BIL、Cr,BUN降低;对肝纤维化的测定结果显示:黄芩能够明显降低血清HA、LN、和CⅣ的含量;肝组织HE染色结果显示,黄芩治疗组的肝损伤程度明显减轻。2.黄芩对肝腹水模型大鼠作用机制研究(1)提高胶体渗透压:黄芩干预后,对比给药前大鼠,给药组血浆COP升高,血清ALB、TP均有不同程度升高。提示黄芩改善了肝腹水模型大鼠低蛋白血症,进而提高了的血浆胶体渗透压。(2)调节电解质平衡:给药后,黄芩各有效组分血清K+水平较模型组明显升高;黄芩各有效组分血清Na+水平较模型组明显升高,提示黄芩通过改善血清离子紊乱,进而调节了电解质平衡。(3)调节RAAS系统:对SRA-Ang Ⅱ的检测结果表明,黄芩各有效药物组干预后血清SRA,血浆AngⅡ水平均降低。(4)抑制抗利尿激素的分泌:与模型组大鼠血浆AVP水平升高比较,黄芩各有效组分给药干预后,血浆AVP浓度均有所降低。黄芩对ET-1水平未见显著性改变。(5)对相关水通道蛋白及AVP受体表达的影响:黄芩各有效组分V2R蛋白表达、V2R-mRNA较模型组显著降低,与AVP的测定结果趋势相符;药物组肾脏AQP2蛋白表达水平、AQP2-mRNA相对表达量较模型组有不程度的降低;黄芩各有效组分给药后,胆总管AQP4蛋白表达、AQP4-mRNA较模型组增强。结论:1.黄芩对肝硬化腹水模型大鼠有明显的治疗作用。2.黄芩对肝硬化腹水模型大鼠的作用机制包括:(1)改善肝肾功能;(2)改善低蛋白血症(ALB、TP)和升高胶体渗透压(COP);(3)调节电解质紊乱,调节血管通透性;(4)上调胆总管AQP4的表达,促进胆汁分泌排泄;(5)抑制 RASS、下调 Ang Ⅱ、SRA、AVP、V2R、AQP2,减轻水钠潴留,促进尿液排泄。