小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内动态分布与表达的研究

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本文围绕小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因检测方法、GPV的VP3基因疫苗及GPV弱毒疫苗免疫小鼠以后在机体分布及表达等开展了以下研究:①特异性检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)的建立;②将GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组BALB/c小鼠;将GPV弱毒疫苗以每只100μl通过肌肉注射免疫一组BALB/c小鼠,免疫后不同时间分别取各组小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、胃和免疫部位组织(肌肉或皮肤)等组织器官,通过建立的FQ-PCR和免疫组织化学方法检测pcDNA-GPV-VP3及其表达产物和GPV弱毒在BALB/c小鼠体内的动态分布。获得如下结果:1.建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,核酸模板数与FQ-PCR测定的Ct值具有很好的直线相关性(相关系数达到0.999)。2.pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后1-3h后可分布至小鼠体内各组织器官中且含量达到最大,随后含量下降,但仍能持续存在31wk以上。3.在肌肉注射pcDNA-GPV-VP3三组中,基因疫苗的剂量和基因疫苗在组织中的含量呈现正相关性,15wk前差异显著(P<0.05),但15wk后差异不显著(P>0.05);在基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3三组中,基因疫苗的剂量和基因疫苗在组织中的含量呈现较弱的正相关性,各剂量之间差异不显著(P>0.05)。4.在肌肉注射pcDNA-GPV-VP3三组中,表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性;基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3三组中,表达产物在心、免疫部位皮肤、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现较弱的正相关性。5.肌肉注射和基因枪轰击都是pcDNA-GPV-VP3良好的免疫途径,基因枪轰击基因疫苗剂量很小,但基因疫苗在多种组织中较肌肉注射先检测出表达产物且持续时间长,表达量多,基因枪轰击免疫要优于肌肉注射免疫。6.对小鼠免疫GPV弱毒疫苗后,GPV能快速分布到小鼠机体各组织,在1d-1wk期间含量达到最大,随后含量快速下降,但仍能持续存在31wk以上;用免疫组织化学在小鼠的免疫部位肌肉、心、。肾和肝细胞细胞核中检测到GPV。
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