【摘 要】
：
猪附红细胞体病(Mycoplasma suis)是由猪附红细胞体引起的,以发热、贫血、黄疽等为主要临床症状的人畜共患病,能引起仔猪贫血、稽留热,育肥猪生长发育迟缓以及母猪不孕、流产
论文部分内容阅读
猪附红细胞体病(Mycoplasma suis)是由猪附红细胞体引起的,以发热、贫血、黄疽等为主要临床症状的人畜共患病,能引起仔猪贫血、稽留热,育肥猪生长发育迟缓以及母猪不孕、流产等生理障碍,并可通过血液等多种方式传播,严重影响了畜牧业的发展和人类的健康。目前针对于猪附红细胞体病尚未研制出特效药物,所以尽早地检测和掌握猪附红细胞体的感染状况对该病的有效控制十分重要。为此,本试验建立了一种敏感、特异、安全和省时的猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法。首先根据GenBank上发布的猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因序列设计一对常规引物,通过PCR扩增获得猪附红细胞体的目的基因片段(Ms232),并将其克隆至pMD18-T载体,构建pMD18-T-Ms232重组质粒,经质粒PCR和酶切鉴定后送往测序,完成目的基因的鉴定。参照常规引物序列,分别在上游和下游引物的5’端标记生物素(BIOT)和地高辛(DIG),合成一对标记引物,并在相同条件下,以此为引物进行PCR扩增,得到在两端分别带有以上2种标记物的目的基因片段。将该目的基因的PCR产物加入以链霉亲和素包被的酶标板中,目的基因通过其一端的生物素与链霉亲和素相结合固定于孔底。接着加入碱性磷酸酶(AKP)标记的抗地高辛抗体,使其与目的基因另一端的地高辛发生反应,最后加入相应的底物进行显色,并检测其OD405nm值。同时,通过标记方法改良、平台期摸索、方阵滴定等方法对PCR扩增、包被液浓度、封闭条件等环节进行优化,筛选出最优的条件。结果显示所设计的常规引物可准确扩增猪附红细胞体的目的基因片段,保证了标记引物的有效性。各项检测结果表明,所建立的PCR-ELISA检测方法的敏感度为0.36pg猪附红细胞体基因组DNA,比常规PCR高10倍,且不与猪链球菌、猪肺炎支原体、犬附红细胞体等基因组DNA发生交叉反应,具有较强的特异性。通过优化,该方法较传统PCR-ELISA法可节约近2h。对73份猪被检血液的阳性检出率为42.5%,高于常规PCR法的34.2%。本试验建立了一种敏感、特异、安全、省时的猪附红细胞体检测方法,为猪附红细胞体病的早期诊断和流行病学调查奠定了一定基础。
其他文献
摘要：素质教育背景下的课堂教学改革要以学生发展为本位、以学生学为本位、以开放生成为本位，所以随着新课程的深入实施，教师要调整自己的角色定位，转变传统的教育教学方式。学生主动参与、亲身实践、独立思考、合作探究，发展学生搜集和处理信息的能力、获取新知识的能力、分析和解决问题的能力，以及交流与合作的能力。既要有教师的讲授与指导，又要有学生的自主探索与合作交流。 关键词：教师 角色 合作 学习 随着义
“数学素养”一词首次出现在我国数学教学大纲中，标志着我国数学教育目标从应试型向累质型方向的转变。提高学生“数学素养”是提高民族素质、丰富人才资源这一战略的重要组成
摘要：近年来，随着课程改革的开展，人们对如何提高课堂教学有效性的思考也在逐步加深。什么样的教学才是有效教学？教学论专家余文森教授作过很通俗的解说：“课堂教学的有效性是指通过课堂教学活动，学生在学业上有收获、有提高、有进步。具体表现在：学生在认知上，从不懂到懂，从少知到多知，从不会到会；在情感上，从不喜欢到喜欢，从不热爱到热爱，从不感兴趣到感兴趣。”它既关注学生当前的发展，又关注学生未来的发展，可持
新课改倡导教育以学生的发展为本，促进学生全面和谐的发展。从新的课程标准和新的教材中可以看出，教学必须要立足于学习方式的改变。学习方式不是单一的，而是多种方式要彼此包容
一、设计理念rn在以培养语言交际能力为主的素质教育背景下，语法教学应与交际法语言课程相结合，应联系语义教语法，联系情景教语法，联系功能教语法。高中英语语法教学尤其应遵循实
借改革、开放的时代大潮,仅仅10年时间,商品经济的足迹就已踏遍全国城乡,进入了我们每一个人的生活。以往生存在计划经济或半自然经济环境中的人们,对商品经济已经由陌生到
化学实验室作为高中化学教学过程中的重要构成和人才培养的重要场所，对于提高高中学生对于化学物质的识别，以及理解化学反应发生的原因、过程和结果来说都具有很重要的意义。与
“兴趣是最好的老师”，在课堂教学以外，我们还组织八年级学生进行学科活动，我们经过精心设计，组织了生动有趣的“物理趣味实验竞赛”活动，大大提高了学生学习物理的兴趣，培养了他们
时代向数学提出新要求，不仅要以必需的数学知识去武装公民以满足他们生活，工作的需要，更重要的是通过数学教学去开发人的智力，提高人的思维能力。素质教育是以提高学生整体素质为
何谓“勾推法”?毛泽东同志1958年11月间在和吴冷西同志的一次谈话中说:“唐朝有一个太守,他问官司,先去了解原告被告周围的人和周围的情况,然后再审原告被告。这叫作‘勾推