不同抗性水稻植株感染RSV后的代谢轮廓分析

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水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻条纹叶枯病是我国水稻中最为重要的一类病害,是通过介体灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)进行持久性方式经卵传播的。本文通过高传毒能力(高亲和)的灰飞虱群体接种遗传背景基本相同但抗感性存在差异的两个水稻品种(系),获得同期同条件下的病株和健株。利用一种基于气相色谱与质谱联用(GC-MS)技术的代谢组学分析方法来研究不同抗性水稻品种(系)的代谢轮廓差异,以期深入地揭示RSV的致病机理和品种的抗性机制。从云南RSV病区采集灰飞虱,经过连续多代的人工筛选,构建出对RSV亲和性高的灰飞虱群体。生物学接种鉴定高亲和性灰飞虱群体的发病率从F0代的13.2%上升到F2代的89.1%,F3代~F6代都基本维持在90.0%左右,并且高亲和性群体在经过2代无人工选择压力后仍可保持在高发病率,说明构建的高亲和性群体不仅具有很高的带毒率而且具有较好的遗传稳定性。同时选取育好的武育粳3号及其变种KT95-418水稻幼苗,凭借高亲和性灰飞虱群体的传毒,通过后期的田间观察及RT-PCR检测,结果表明获得相应的两个品系水稻病株。通过初步构建的植物代谢物提取流程,来提取两个不同抗性品种(系)的水稻植株:武育粳3号健株(WS)、武育粳3号病株(WSB)、KT95-418健株(WB)、KT95-418病株(WBB),得到相应的代谢产物,借助GC技术来进行辨认。结果表明:四个样品中相关代谢产物的含量并不高,但是各保留时间的变化还是较大的,四个样品间存在着明显的差异。以KT95-418病株样品结果为参照,结果表明在保留时间(min)3.176、3.566、11.538、12.244、16.216、17.985时分离出的代谢物可能与RSV的感病性有关,而在保留时间(min)3.453、5.739、5.831、8.052、10.155、19.272、23.842分离出的代谢物可能与品种(系)的RSV抗性相关。最后凭借GC-MS分析,获得四个样品的挥发性成分离子流色谱图。经过峰面积相对标准偏差(RSD)计算,表明各相对偏差较小,可进行后续分析。通过软件分析和谱库检索,发现WS中有内源性代谢物12种、WSB中11种、WB中9种、WBB中14种。其中WS和WSB中共有内源性代谢物5种,WB和WBB中共有内源性代谢物6种,四个样品中共有内源性代谢物4种。通过分别计算相对峰面积(与内标峰的比值),测算代谢物的含量,结果表明四个样品中的共有内源性代谢物含量均存在差异,经分析显示在保留时间(min)10.53时分离出来的2, 4-二甲基苯甲醛可能为感病性代谢产物,而在保留时间(min)7.59和10.73时分离出来的三甲基苯酚和2-(2-乙烯基)噻吩可能为抗病性代谢产物。最后运用主成分分析(PCA)方法对这一变化过程进行模式识别。研究发现,不同抗性品种(系)水稻植株的代谢轮廓(谱)存在着一定的变化规律。不同抗性的两个水稻品种(系)的健株在代谢产物上存在较大差异,而相应的病株则差异较小,武育粳3号的健病株之间的差异也相对小,KT95-418的健病株之间存在明显的变化。这一现象表明受RSV感染后,水稻KT95-418植株较武育粳3号更易抵御RSV的侵染,抗性更强。其中,保留时间(min)7.59、10.53和10.73分离出来的三甲基苯酚、2, 4-二甲基苯甲醛和2-(2-乙烯基)噻吩对四种样品的分类贡献较大,可以用来判别水稻武育粳3号和KT95-418植株受RSV侵染的影响指标。综合上述分析,说明2, 4-二甲基苯甲醛可能与水稻对RSV的感病性相关,而三甲基苯酚和2-(2-乙烯基)噻吩对RSV起到抗性作用。
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