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HER2/neu受体是EGFR家族成员中的第2号,在许多上皮肿瘤中过度表达,尤其是乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和鼻咽癌等。HER2/neu基因编码一个185KDa的跨膜蛋白,具有胞外区、跨膜区和胞内区三大结构域。EGF样配体触发HER2/neu二聚复合物的形成,受体激活后发生自生磷酸化,并激活PI3K/AKt途径和Ras/MAPK途径,进而诱发细胞的转型、恶性增殖并增强迁移潜能。研究表明,约30%的乳腺癌患者有HER2/neu基因的扩增和过度表达,HER2/neu受体的过度表达与肿瘤的分级、大小、淋巴结转移有关。HER2过表达的乳腺癌恶性程度高、迁移性和侵润性强,这类患者对化疗药物不敏感,治疗后易复发,总的存活期和无病生存期短。目前治疗复发率高、转移性强的恶性乳腺癌主要是化学疗法,而化疗药物中首推紫杉醇,但针对p185高表达类的恶性乳腺癌却折扣了包括紫杉醇在内的化疗药物的疗效。因此,迫切需要发现更有效的治疗方案。由于HER2的表达水平直接与细胞癌化进程有关,这种极好的靶抗原促进人们去发现一种具有高度专一性的抗癌药物。鉴于HER2定位于肿瘤细胞表面,且它在正常组织中表达量极低,使得它成为一个容易为药物接近的靶分子。该研究组在以往的工作中已成功构建了抗p185c-erbB-2/neu单克隆抗体A21,并对它的可变区的基因序列进行了克隆和序列分析,该将单抗的轻链和重链连接在一起构建了单链抗体（scFv）,再将其与人的抗体IgG1的恒定区Fc片段连接,构建了scFv-Fc嵌合体,即p185cerbB-2/neu基因工程抗体。随后对基因工程抗体进行了细胞增殖抑制作用的检测,初步证明该抗体具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。本研究旨在探讨基因工程抗体与紫杉醇联用可增强p185高表达人的乳腺癌细胞BT474对紫杉醇的敏感性,并在此基础上探讨p185高表达人的乳腺癌细胞BT474对紫杉醇耐药性的分子机制。为临床诊断和治疗提供参考,以及为将基因工程抗体发展成为抗肿瘤药物提供理论依据。采用MTS法检测细胞增殖的抑制作用,TUNEL法和Annexin V-FITC/PI法分别定性和定量地检测凋亡细胞。结果发现:基因工程抗体与紫杉醇联用组较基因工程抗体或紫杉醇单用组而言,对BT474增殖的抑制作用具有协同效应,并显著增强对细胞凋亡的诱导作用。采用IP和Westernblot分析HER2酪氨酸的磷酸化水平,Westernblot分析AKt、MAPK、NF-κB磷酸化水平。结果发现:紫杉醇组较基因工程抗体组或联用组而言,HER2酪氨酸、AKt（Ser473）、p44/p42MAPK（Thr202/Tyr204）、NF-κB p65亚基磷酸化水平相对较高。采用EMSA分析NF-κB与DNA的结合活性。结果发现:不同浓度、不同处理时间条件下的紫杉醇组较基因工程抗体组或联用组而言,NF-κB与DNA的结合活性均显著增强。采用FACS分析DNA含量和细胞周期分布,SAS（9.0）软件分析细胞S期百分比与增殖指数的关系。Westernblot分析CyclinD1、VEGF及MMP-9表达水平。结果发现:S期百分比与增殖指数呈典型正相关（r=0.963）。紫杉醇组较基因工程抗体组或联用组而言,S期百分比、CyclinD1、VEGF及MMP-9表达水平均相对较高